Что такое окраска по граму
Микробиология. Окраска по Граму: красители, проведение, результаты
В микробиологии окраска по Граму имеет большое значение. Ее применяют для диагностики инфекционных заболеваний, выявления патогенности бактерий. Метод позволяет определить сходные по форме и размеру бактерии, которые относятся к различным видам и родам.
Особенности окраски
Окраска бактерий по Граму – сложный метод, в котором применяют два вида окраса: основной и дополнительный. В процессе выполнения манипуляции применяют обесцвечивающие вещества, к которым относятся спирты и кислоты.
Вам будет интересно: Какая у вас степень владения языком?
В микробиологии окраску по Граму проводят трифенилметановой группой красителей. К ней относятся генциановые, метиловый синий, кристаллвиолет. Разные виды бактерий дают разные окрасы, образуя прочные соединения с красителями.
Окрасы
В микробиологии окраска по Граму бывает двух видов: грамположительная и грамотрицательная. В первом случае микроорганизмы дают прочные соединения с красителями и йодом. Во время анализа они не обесцвечиваются при воздействии со спиртом, из-за чего не изменяют своего первоначального фиолетового оттенка.
Грамотрицательные окрасы образуются при воздействии с йодом и легко разрушаются под действием йода. В результате микробы обесцвечиваются, а затем приобретают красный оттенок.
Подготовка материала
По правилам микробиологии, окраска по Граму требует предварительной подготовки материалов. Его необходимо распределить тонким слоем по поверхности стекла. Затем мазок подсушивают и после полного высыхания фиксируют. При этом мазок закрепляется на стекле, что позволяет исключить смывание бактерий красителями. К тому же мертвые микроорганизмы окрашиваются лучше, чем живые.
После подготовки материала подбирают метод окрашивания: физический или химический. Первый предполагает воздействие высокой температуры на микробную клетку. Во время химического способа применяют различные химические вещества, которые вызывают коагуляцию протеинов цитоплазмы.
Подготавливают набор для окраски по Граму, предметные стекла с бактериями. Их берут пинцетом или аккуратно пальцами за ребра мазком вверх, затем проводят пару раз над верхом пламени горелки. Процесс должен занимать пару секунд.
Процесс фиксации химическим методом предполагает использование ацетона, спирта, специальных смесей, жидкость Карнуа. Предметное стекло с высушенным мазком погружают в фиксирующее вещество на пятнадцать минут, затем просушивают на воздухе.
Окрашивание
Окраска мазков по Граму проводится по определенному алгоритму.
Чтобы определить, есть ли в мазке грамотрицательные бактерии, проводят дополнительно окрашивание фуксином или сафранином. Препараты наносят на две минуты. В конце процедуры стекло промывают, высушивают.
Результаты
Все грамположительные микроорганизмы окрашиваются в темно-фиолетовый цвет, а грамотрицательные – в красный. Шарообразные формы обычно относятся к грамположительным видам, а извитые формы – отрицательно окрашиваются. Палочковидные бактерии могут быть грамотрицательными и грамположительными.
Чтобы получить максимально достоверные результаты исследований, рекомендуется применять суточные культуры, а также свежеприготовленные растворы для окрашивания.
Механизм окраски позволяет увидеть и оценить физико-химические особенности строения цитоплазмы, клеточные стенки грамположительных и грамотрицательных бактерий. У первых содержится много рибонуклеиновой кислоты, белков в цитоплазме, а в клеточных стенках – пептидогликана. Из-за этого во время обработки мазков генцианвиолетом и Люголем у грамположительных видов бактерий образуется прочное соединение ионов йода и красителя.
При обработке спиртами грамположительные микроорганизмы удерживают краситель, а грамотрицательные – обесцвечиваются и окрашиваются дополнительно разведенным фуксином в красный оттенок. Некоторые бактерии способны окрашиваться только на стадии роста.
Применение
Окраску по Граму проводят при анализе вида микроорганизмов в мазках из влагалища и слюны. Этот способ позволяет определить вид микроорганизмов в кале, в плевральной, перитонеальной жидкости и не только. Любые жидкости, где могут содержаться бактерии, исследуют данным методом. После проведения окрашивания врачи подбирают метод лечения, назначая препараты, способные воздействовать на грамположительные или грамотрицательные бактерии.
Окрашивание по Граму
Метод Грама — метод окраски микроорганизмов для исследования, позволяющий дифференцировать бактерии по биохимическим свойствам их клеточной стенки. Предложен в 1884 году датским врачом Г. К. Грамом.
По Граму бактерии окрашивают осно́вными красителями — генциановым или метиловым фиолетовым и др., затем краситель фиксируют раствором йода. При последующем промывании окрашенного препарата спиртом те виды бактерий, которые оказываются прочно окрашенными, называют грамположительными бактериями (обозначаются Грам (+)), — в отличие от грамотрицательных (Грам (−)), которые при промывке обесцвечиваются.
Содержание
Использование в диагностике
Окраска по Граму имеет большое значение в систематике бактерий, а также для микробиологической диагностики инфекционных заболеваний.
Грамположительны кокковые и спороносные формы бактерий, а также дрожжей, они окрашиваются в иссиня-чёрный (тёмно-синий) цвет.
Грамотрицательны многие неспороносные бактерии, они окрашиваются в красный цвет, ядра клеток приобретают ярко-красный цвет, цитоплазма — розовый.
Техника проведения окраски
Окраска по Граму относится к сложному способу окраски, когда на мазок воздействуют двумя красителями, из которых один является основны́м, а другой — дополнительным. Кроме красящих веществ при сложных способах окраски применяют обесцвечивающие вещества: спирт, кислоты и др.
Для окраски по Граму чаще используют красители трифенилметановой группы: генциановый, метиловый фиолетовый или кристаллвиолет. Грамположительные Грам (+) микроорганизмы дают прочное соединение с указанными красителями и йодом. При этом они не обесцвечиваются при воздействии на них спиртом, вследствие чего при дополнительной окраске фуксином Грам (+) микроорганизмы не изменяют первоначально принятый фиолетовый цвет.
Грамотрицательные Грам (−) микроорганизмы образуют с основными красителями и йодом легко разрушающееся под действием спирта соединение. В результате микробы обесцвечиваются, и затем окрашиваются фуксином, приобретая красный цвет.
Подготовка материала для окраски
Исследуемый материал распределяют тонким слоем по поверхности хорошо обезжиренного предметного стекла. Приготовленный мазок высушивают на воздухе и после полного высыхания фиксируют. Гистологические срезы готовят по рутинной методике, фиксируя кусочки тканей в формалине и заливая в парафин.
Фиксация
При фиксировании мазок закрепляется на поверхности предметного стекла, и поэтому при последующей окраске препарата микробные клетки не смываются. Кроме того, убитые микробные клетки окрашиваются лучше, чем живые.
Различают физический способ фиксации, в основу которого положено воздействие высокой температуры на микробную клетку, и химические способы, предусматривающие применение химических средств, вызывающих коагуляцию белков цитоплазмы.
Физический способ фиксации
Предметное стекло с препаратом берут пинцетом или I и II пальцами правой руки за рёбра мазком кверху и плавным движением проводят 2—3 раза над верхней частью пламени горелки. Весь процесс фиксации должен занимать не более 2 с.
Надёжность фиксации проверяют следующим приёмом: свободную от мазка поверхность предметного стекла прикладывают к тыльной поверхности левой кисти. При правильном фиксировании мазка стекло должно быть горячим, но не вызывать ощущения ожога (70—80 °С).
Химический способ фиксации
Для фиксации мазков применяют метиловый спирт, ацетон, смесь Никифорова (смесь этилового спирта 96 % и наркозного эфира в соотношении 1:1), жидкость Карнуа (этилового спирта 96 % — 60 %, хлороформа 30 %, ледяной уксусной кислоты 10 %). Предметное стекло с высушенным мазком погружают в склянку с фиксирующим веществом на 10—15 минут и затем высушивают на воздухе.
Процесс окрашивания мазков
Техника окраски бактерий в гистологических срезах по Граму-Вейгерту
Результат: грамположительные бактерии сине-черные, фибрин фиолетовый, ядра красные.
См. также
Ссылки
На немецком языке
На английском языке
Полезное
Смотреть что такое «Окрашивание по Граму» в других словарях:
окрашивание по Граму — Метод окрашивания микробиологических препаратов, разработанный Хансом Грамом (1853 1938, Дания) и позволяющий идентифицировать две группы бактерий грам положительные и грам отрицательные; различия в окраске обусловлены особенностями… … Справочник технического переводчика
окрашивание по Граму — Gram stain окрашивание по Граму. Метод окрашивания микробиологических препаратов, разработанный Хансом Грамом (1853 1938, Дания) и позволяющий идентифицировать две группы бактерий грам положительные и грам… … Молекулярная биология и генетика. Толковый словарь.
ОКРАШИВАНИЕ ПО ГРАМУ — (Grams stain) метод окрашивания бактериальных клеток, применяемый для их первичной идентификации. Тонкий слой, содержащий бактерии; наносится на предметное стекло, высушивается и фиксируется воздействием тепла; затем окрашивается фиолетовым… … Толковый словарь по медицине
Окрашивание По Граму (Gram’S Stain) — метод окрашивания бактериальных клеток, применяемый для их первичной идентификации. Тонкий слой, содержащий бактерии; наносится на предметное стекло, высушивается и фиксируется воздействием тепла; затем окрашивается фиолетовым красителем,… … Медицинские термины
Окрашивание микробов — Окраска микроорганизмов (крашение микробов) комплекс методов и приемов для исследования внешнего и внутреннего строения микроорганизмов, метод микробиологической техники, позволяющий различать виды микроорганизмов. Метод широко используют в… … Википедия
Грамотрицательные бактерии — Фотография сделанная трансмиссионым электронным микроскопом. Клеточные покровы цианобактерии Phormidium uncinatum. Клеточные покровы (CW) состоит из, цитоплазматической мембраны (CM), пептидогл … Википедия
БАКТЕРИИ — обширная группа одноклеточных микроорганизмов, характеризующихся отсутствием окруженного оболочкой клеточного ядра. Вместе с тем генетический материал бактерии (дезоксирибонуклеиновая кислота, или ДНК) занимает в клетке вполне определенное место… … Энциклопедия Кольера
Gram stain — Gram stain. См. окрашивание по Граму. (Источник: «Англо русский толковый словарь генетических терминов». Арефьев В.А., Лисовенко Л.А., Москва: Изд во ВНИРО, 1995 г.) … Молекулярная биология и генетика. Толковый словарь.
ТУБЕРКУЛЕЗ — ТУБЕРКУЛЕЗ. Содержание: I. Исторический очерк. 9 II. Возбудитель туберкулеза. 18 III. Патологическая анатомия. 34 IV. Статистика. 55 V. Социальное значение туберкулеза. 63 VІ.… … Большая медицинская энциклопедия
ОКРАСКА — (микроорганизмов). Мазок на предметном или покровном стекле высушивается на воздухе; высушивание над пламенем не рекомендуется, допускается лишь помещение препарата вблизи пламени. Высушенный препарат фиксируется троекратным проведением через… … Большая медицинская энциклопедия
Окраска по Граму
Метод Грама — метод окраски микроорганизмов для исследования, позволяющий дифференцировать бактерии по биохимическим свойствам их клеточной стенки. Предложен в 1884 году датским врачом Г. К. Грамом.
По Граму бактерии окрашивают осно́вными красителями — генциановым или метиловым фиолетовым и др., затем краситель фиксируют раствором йода. При последующем промывании окрашенного препарата спиртом те виды бактерий, которые оказываются прочно окрашенными, называют грамположительными бактериями (обозначаются Грам (+)), — в отличие от грамотрицательных (Грам (−)), которые при промывке обесцвечиваются.
Содержание
Использование в диагностике
Окраска по Граму имеет большое значение в систематике бактерий, а также для микробиологической диагностики инфекционных заболеваний.
Грамположительны кокковые и спороносные формы бактерий, а также дрожжей, они окрашиваются в иссиня-чёрный (тёмно-синий) цвет.
Грамотрицательны многие неспороносные бактерии, они окрашиваются в красный цвет, ядра клеток приобретают ярко-красный цвет, цитоплазма — розовый.
Техника проведения окраски
Окраска по Граму относится к сложному способу окраски, когда на мазок воздействуют двумя красителями, из которых один является основны́м, а другой — дополнительным. Кроме красящих веществ при сложных способах окраски применяют обесцвечивающие вещества: спирт, кислоты и др.
Для окраски по Граму чаще используют красители трифенилметановой группы: генциановый, метиловый фиолетовый или кристаллвиолет. Грамположительные Грам (+) микроорганизмы дают прочное соединение с указанными красителями и йодом. При этом они не обесцвечиваются при воздействии на них спиртом, вследствие чего при дополнительной окраске фуксином Грам (+) микроорганизмы не изменяют первоначально принятый фиолетовый цвет.
Грамотрицательные Грам (−) микроорганизмы образуют с основными красителями и йодом легко разрушающееся под действием спирта соединение. В результате микробы обесцвечиваются, и затем окрашиваются фуксином, приобретая красный цвет.
Подготовка материала для окраски
Исследуемый материал распределяют тонким слоем по поверхности хорошо обезжиренного предметного стекла. Приготовленный мазок высушивают на воздухе и после полного высыхания фиксируют. Гистологические срезы готовят по рутинной методике, фиксируя кусочки тканей в формалине и заливая в парафин.
Фиксация
При фиксировании мазок закрепляется на поверхности предметного стекла, и поэтому при последующей окраске препарата микробные клетки не смываются. Кроме того, убитые микробные клетки окрашиваются лучше, чем живые.
Различают физический способ фиксации, в основу которого положено воздействие высокой температуры на микробную клетку, и химические способы, предусматривающие применение химических средств, вызывающих коагуляцию белков цитоплазмы.
Физический способ фиксации
Предметное стекло с препаратом берут пинцетом или I и II пальцами правой руки за рёбра мазком кверху и плавным движением проводят 2—3 раза над верхней частью пламени горелки. Весь процесс фиксации должен занимать не более 2 с.
Надёжность фиксации проверяют следующим приёмом: свободную от мазка поверхность предметного стекла прикладывают к тыльной поверхности левой кисти. При правильном фиксировании мазка стекло должно быть горячим, но не вызывать ощущения ожога (70—80 °С).
Химический способ фиксации
Для фиксации мазков применяют метиловый спирт, ацетон, смесь Никифорова (смесь этилового спирта 96 % и наркозного эфира в соотношении 1:1), жидкость Карнуа (этилового спирта 96 % — 60 %, хлороформа 30 %, ледяной уксусной кислоты 10 %). Предметное стекло с высушенным мазком погружают в склянку с фиксирующим веществом на 10—15 минут и затем высушивают на воздухе.
Процесс окрашивания мазков
Техника окраски бактерий в гистологических срезах по Граму-Вейгерту
Результат: грамположительные бактерии сине-черные, фибрин фиолетовый, ядра красные.
См. также
Ссылки
На немецком языке
На английском языке
Полезное
Смотреть что такое «Окраска по Граму» в других словарях:
окраска по Граму — Специальная система окраски бактерий, позволяющая дифференцировать строение бактериальной стенки [http://www.dunwoodypress.com/148/PDF/Biotech Eng Rus.pdf] Тематики биотехнологии EN Gram stain … Справочник технического переводчика
Окраска микроорганизмов — (крашение микробов) комплекс методов и приёмов для исследования внешнего и внутреннего строения микроорганизмов, метод микробиологической техники, позволяющий различать виды микроорганизмов. Метод широко используют в прикладной… … Википедия
окраска дифференциальная — специальные приемы окраски, позволяющие различать микроорганизмы сходной формы, размеров, но относящиеся к различным видам. Напр., окраска по Граму. (Источник: «Микробиология: словарь терминов», Фирсов Н.Н., М: Дрофа, 2006 г.) … Словарь микробиологии
Окраска микроорганизмов — один из широко применяемых методов микробиологической техники (См. Микробиологическая техника), заключающийся в окраске фиксированных клеток микроорганизмов специальными красителями. Вначале в каплю воды, находящуюся на предметном или… … Большая советская энциклопедия
ОКРАСКА — (микроорганизмов). Мазок на предметном или покровном стекле высушивается на воздухе; высушивание над пламенем не рекомендуется, допускается лишь помещение препарата вблизи пламени. Высушенный препарат фиксируется троекратным проведением через… … Большая медицинская энциклопедия
окраска бактерий по Граму — метод дифференциальной окраски клеток прокариот, разработанный датским микробиол. X. Громом в 1884 г. Заключается в последовательной обработке мазка клеток основными красителями (напр., кристаллическим фиолетовым) и иодом и последующем отмывании… … Словарь микробиологии
ОКРАСКА МИКРООРГАНИЗМОВ — окраска микроорганизмов, метод бактериологического исследования, применяемый для обнаружения и изучения микробов при микроскопировании препаратов. Последние могут быть приготовлены из культур микробов или нативного материала тканей органов … Ветеринарный энциклопедический словарь
Окрашивание по Граму — Метод Грама метод окраски микроорганизмов для исследования, позволяющий дифференцировать бактерии по биохимическим свойствам их клеточной стенки. Предложен в 1884 году датским врачом Г. К. Грамом. По Граму бактерии окрашивают основными… … Википедия
Грама окраска — см. окраска бактерий по Граму. (Источник: «Микробиология: словарь терминов», Фирсов Н.Н., М: Дрофа, 2006 г.) … Словарь микробиологии
Крашение микробов — Окраска микроорганизмов (крашение микробов) комплекс методов и приемов для исследования внешнего и внутреннего строения микроорганизмов, метод микробиологической техники, позволяющий различать виды микроорганизмов. Метод широко используют в… … Википедия
Окраска по Граму
Наиболее широко в микробиологической практике применяется сложный метод окраски по Граму (предложен впервые в 1884 г. датским ученым X. Грамом). Метод является одним из важнейших опознавательных признаков при определении вида бактерий.
К другой группе относятся виды, которые не способны удерживать красящий комплекс и обесцвечиваются при обработке спиртом. Их называют грамотрицательными (грам-). К числу их принадлежат многие виды неспорообразующих палочковидных бактерий, в т.ч. роды Pseudomonas, Escherichia, Salmonella, Proteus и др.
Способность или неспособность клеток удерживать красящий комплекс в настоящее время связывают с химическим составом и структурой клеточных стенок бактерий. В оболочках грам + бактерий содержится больше гликопептида муреина, полисахаридов и тейхоевые кислоты. Они имеют достаточно плотную многослойную структуру. В клетках грам+ бактерий генциан-виолет и йод образуют прочное соединение с цитоплазмой, которое не извлекается спиртом. Они сохраняют фиолетовый цвет генциан-виолета и при дополнительном окрашивании фуксином Пфейффера.
Оболочки грам- бактерий однослойны, в них отмечено высокое содержание липидов в виде липопротиидов и липополисахаридов. Грам- бактерии при обработке спиртом обесцвечиваются, т.к. у них генциан-виолет не фиксируется в цитоплазме. При дополнительном окрашивании фуксином клетки бактерий окрашиваются только в бледнорозовый цвет.
Грам+ отличаются от грам- не только своим отношением к окраске, но и рядом биологических свойств и особенностей. Большинство грам+ видов обладают повышенной устойчивостью к обезвоживанию, термической обработке, радиоактивным и другим типам излучений. В тоже время грам-бактерии более устойчивы к действию щелочей и протеолитических ферментов, а также антибиотиков.
Окраску по Граму используют при определении степени загрязнения пищевых продуктов посторонней, в т.ч. условно патогенной (кишечная группа) микрофлорой, для выяснения диапазона действия антибиотиков и др. целей. Следует учитывать, что некоторые виды бактерий будучи грам+ в молодом возрасте, в старых культурах не все интенсивно красятся по Граму. Поэтому для окраски следует брать односуточные или двухсуточные культуры и, кроме того, пользоваться для сравнения контрольными культурами (стандартами), отношение которых к окраске по Граму заранее известно.
Окраска по Граму проводится следующим образом:
1. На одном предметном стекле готовят три мазка из бактериальных культур: заведомо известной Грамположительной, исследуемой и заведомо известной Грамотрицательной.
2. Мазки высушивают и фиксируют пламенем.
3. Окрашивают карболовым раствором генциан-виолета в течение 1-2 мин.
4. Краску удаляют стряхиванием, на мазки наносят раствор Люголя (раствор J и КJ) и выдерживают 1-2 мин. до почернения мазка.
5. Сливают раствор Люголя и на препарат наносят несколько капель 96% спирта и слегка покачивая стекло, выдерживают его до осветления мазка. (20-30 сек).
Препарат немедленно промывают водой. От обработки мазка спиртом зависит результат всего окрашивания: при недостаточной обработку все бактерии сохраняют окрашивание, при излишней – все клетки обесцвечиваются.
6. Дополнительно окрашивают препарат фуксином Пфейффера (разведенный фуксин) в течение 2 мин.
7. Краску смывают, препарат подсушивают и смотрят с иммерсионным объективом 90х.
Если препарат приготовлен правильно, то в поле зрения видны грам + темно-фиолетовые клетки и рядом с ними хорошо различаются бледно-розовые грам- клетки.
Нам важно ваше мнение! Был ли полезен опубликованный материал? Да | Нет
Методика окраски по Граму: подготовка, проведение, оценка результата
Методика окраски по Граму – экспресс-метод, позволяющий определить вид бактерий. Технология выявления патогена разработана бактериологом Гансом Грамом. Он был необычным человеком, скромным. В своей работе он сказал: «Я публикую методику окраски, заведомо зная, что она имеет некоторые недостатки, но я не теряю надежды, что мой метод будет доработан и станет полезным». Так и произошло. Его технология стала одной из ведущих при определении типа бактерий. Методика окраски по Граму основана на строении прокариот, из-за чего бактерии приобретают тот или иной оттенок.
Вам будет интересно: Обучение финансовой грамотности в школе
Рекомендации
Прежде чем приступить к окрашиванию, необходимо подготовить рабочее место и образец. От качества последнего зависит, насколько хорошим будет результат. К примеру, для анализа берут мокроту глубокого кашля, а не просто слюну.
При работе с образцами обязательно соблюдаются правила безопасности. Во время работы на руках должны быть перчатки. Также стоит быть внимательным при работе со спиртом, ацетоном. Эти вещества огнеопасны и легко воспламеняются при нагревании.
При работе с предметными стеклами их берут аккуратно пинцетом или двумя пальцами за боковые края так, чтобы не трогать мазок.
Подготовка к работе
Начинается методика окраски по Граму с подготовки себя к предстоящей работе. На руки обязательно надеваются стерильные перчатки, длинные волосы должны быть убраны, подвязаны. Рабочее место должно располагаться в стерильном, хорошо проветриваемом помещении. Перед проведением манипуляции обязательно проверяется работоспособность микроскопа.
Следующим шагом будет подготовка предметных стекол. Если они недостаточно чистые, то стекла промывают под проточной водой с мылом. Это поможет удалить грязь, жир. Обязательно поверхность обрабатывается спиртом или другим способом, используемым в лаборатории.
Подготовка образца
Методика окраски по Граму предполагает подготовку образца. Для этого берут предметное стекло и на его центр аккуратно помещают образец. Методика окраски мазков по Граму дает возможность увидеть тип бактерий, культивируемых в чашке Петри.
Для начала работы на стекло наносят тонкий слой исследуемой жидкости. Не стоит ждать более суток от начала забора материала до проведения анализа, так как у многих патогенов разрушается клеточная стенка, и реакция на окрашивание становится совершенно непредсказуемой. Если же предполагается начать исследование тканей, то на предметное стекло стоит нанести пару капель материала. Жидкость распределяется по стеклу ровным слоем ребром другого стекла. Образцу дают подсохнуть.
Если для окраски берут образец из чашки Петри, то процедуру забора материала проводят петлей. А при исследовании мазка его прижимают к предметному стеклу другим стеклом.
Фиксация образца
Методика окраски препарата по Граму предполагает фиксацию образца. Под действием тепла бактерии пристают к стеклу и не смываются.
Для того чтобы закрепить мазок, необходимо провести над горелкой предметное стекло. Нельзя перегревать стекло, чтобы в образце не появилось изменений.
Можно зафиксировать образец метанолом. Для этого на стекло необходимо нанести пару капель метилового спирта, а излишки слить. Стекло просушивается естественным способом. Этот метод предпочтительнее из-за того, что он меньше повреждает исследуемые клетки и показывает более чистый фон.
Окрашивание
Методика приготовления мазка препаратов окраски по Граму предполагает окрашивание в емкости, в которую будет помещен образец. Обычно для этого используется лоток или стеклянное блюдце. В него помещают предметное стекло с препаратом так, чтобы жидкость стекала в лоток.
Сначала на образец наносится раствор кристаллического фиолетового или генцианово-фиолетового. Его набирают в пипетку и несколько капель наносят на препарат. Через минуту проводят оценку результата. Все грамположительные патогены окрасятся в фиолетовый цвет.
Затем краситель смывают водой так, чтобы она слегка обмыла мазок. Далее на образец наносится йод и оставляется на минуту. После этого его так же аккуратно смывают. После этой процедуры на стекло наносится обесцвечивающее вещество. Это может быть раствор ацетона и спирта. Раствором обрабатывают мазок до тех пор, пока не исчезнет фиолетовый оттенок.
На мазок наносится контрастный краситель. Это может быть фуксин или сафран. Он позволяет создать контраст между грамотрицательными и грамположительными бактериями. В результате воздействия препарата грамотрицательные патогены окрашиваются в фуксиевый цвет. Краситель смывают водой.
Завершающим этапом является просушивание предметного стекла. После этого методика окраски по Граму (в микробиологии она используется довольно часто) считается завершенной.
Оценка результатов
Предметное стекло помещают под микроскоп. Грамположительные бактерии в мазке будут окрашены в фиолетовый цвет. Грамотрицательные бактерии окрасятся в розовый или красный оттенок. Такое разнообразие возникает в результате особенности строения стенок патогенов. В одни проникает только фиолетовый краситель, а в другие – фуксиевый.
К ошибочному результату может привести длительное нахождение предметного стекла под действием обесцвечивающей жидкости. Поэтому процедуру проводят дважды, чтобы убедиться в правильности диагноза. Повторный анализ позволяет удостовериться, что окраска проведена правильно.
Во время работы с патогенными микроорганизмами всегда соблюдайте осторожность, так как от этого зависит ваше здоровье.