Что такое отмытые эритроциты
Что такое отмытые эритроциты
Компонент, полученный из цельной крови центрифугированием и удалением плазмы с последующим отмыванием эритроцитов изотоническим раствором.
Компонент представляет собой взвесь эритроцитов, из которой в основном удалены плазма, лейкоциты и тромбоциты. Количество остаточной плазмы зависит от протокола отмывания. Гематокрит может быть различным в зависимости от клинической необходимости. В каждой дозе по окончании переработки должно содержаться не менее 40 г гемоглобина.
После центрифугирования и максимального удаления плазмы и лейкотромбослоя эритроциты обрабатываются последовательным добавлением холодного (+4 оС) изотонического раствора и (предпочтительно рефрижераторным) центрифугированием. Функционально закрытая система может быть приготовлена с использованием устройства для стерильного соединения трубок полимерных контейнеров.
Маркировка должна соответствовать принятым государственным законам и международным соглашениям. На этикетке или в сопровождающей аннотации должны быть отражены следующие сведения:
— время приготовления и срок годности;
— название и объем компонента;
— наименование и адрес производителя (четкий текст или код);
— номер донации;
— группа по системе АВО;
— принадлежность по системе Rh (D), указывая «Rh (D)-положительный», если D-положительный или «Rh (D)-отрицательный», если D-отрицательный;
— состав и объём ресуспендирующего раствора;
— температура хранения;
— что компонент не может быть использован для переливания при наличии аномального гемолиза или других повреждениях;
— что компонент должен быть перелит через фильтр с размером пор 170-200 мкм.
Хранение и стабильность
Компонент должен храниться при температуре от +2 оС до +6 оС. Время хранения после отмывания должно быть максимально сокращено: не более 24 ч, если отмывание и хранение проводилось при +4 оС и не более 6 ч, если отмывание и хранение проводилось при комнатной температуре.
Таблица: Контроль качества
Аналогично цельной крови за исключениями, указанными в табл.
* количество белка в конечной надосадочной жидкости должно обеспечить содержание IgA менее 0,2 мг/доза.
Транспортировка ограничена коротким периодом хранения. Условия хранения должны поддерживаться во время транспортировки. Требуется строгий контроль времени и температуры.
Показания к применению
Отмытые эритроциты показаны для замещения эритроцитов у пациентов с антителами к белкам плазмы, особенно анти- IgA, а также у пациентов с тяжелыми посттрансфузионными аллергическими реакциями.
С использованием установленного метода должна быть верифицирована совместимость отмытых эритроцитов и пациента, которому они предназначены.
Так как при приготовлении компонента возможен перенос в другой контейнер, надлежит принять меры к корректной идентификации всех соответствующих доз и образцов для постановки проб на совместимость.
— циркуляторная перегрузка;
— гемолитическая посттрансфузионная реакция;
— сифилис может быть передан, если компонент приготовлен из дозы крови, которая хранилась менее 96 ч при температуре от +2 оС до +6 оС;
— передача вирусов (гепатит, ВИЧ и т.д.) возможна, несмотря на тщательность отбора доноров и проводимые исследования;
— в редких случаях возможна передача паразитарных инфекций (например, малярии.);
— сепсис как результат непреднамеренной бактериальной контаминации;
— передача других патогенов, которые не исследуются или еще неизвестны.
Метод заготовки лейкофильтрованных отмытых эритроцитов
В.Н. Мельникова, Е.А. Селиванов, Г.Ю. Кирьянова, Т.А. Ефимова
Российский НИИ гематологии и трансфузиологии, г. Санкт-Петербург
Трансфузиология №3, 2010
Предложен метод заготовки эритроцитной среды, максимально лишенной примесей лейкоцитов, тромбоцитов и плазмы путем лейкодеплеции с помощью отечественного устройства-лейкофильтр УЛЛ-01 и последующего отмывания изотоническим раствором натрия хлорида, позволяющий повысить ее иммунологическую и инфекционную безопасность. Обоснована возможность хранения этой среды при 4°С в эритроконсерванте SAGM.
Ключевые слова: эритроциты, лейкодеплеция, отмывание, морфофункциональные свойства, безопасность.
Введение
Принцип гемокомпонентной терапии предусматривает использование для коррекции различных патологических состояний гемотрансфузионных сред, максимально очищенных от «балластных» элементов.
Кроме того, примесь лейкоцитов служит источником накопления в эритроцитных средах цитокинов и протеолитических ферментов, освобождающихся из быстро разрушающихся белых клеток и обладающих мембранотропным (гемолитическим) действием, что существенно ухудшает условия их хранения. Наличие в эритроцитной среде лейкоцитов и тромбоцитов служит основой формирования микросгустков.
Несмотря на то, что наиболее иммуногенной фракцией крови являются лейкоциты, наличие в эритроцитных средах плазмы также далеко не безразлично для больного. Несовместимость донора и реципиента по белкам плазмы проявляются аллергическими, анафилактоидными и анафилактическими осложнениями. Группу риска в этом отношении составляют пациенты с дефицитом IgA. В связи с вышеуказанным для снижения реактогенности и иммуногенности эритроцитных сред их подвергают дополнительной «очистке» с помощью отмывания или лейкофильтрации в тех случаях, когда они используются в программах трансфузионной терапии у гематологических больных, у пациентов с неблагоприятным трансфузиологическим и/или аллергологическим анамнезом, в детской и акушерской практике.
Материалы и методы
Для фильтрования ЭМ использовали первое отечественное «Устройство-лейкофильтр для удаления лейкоцитов из консервированной крови и эритроцитных сред УЛЛ-01» производства ЗАО «НПП «Интероко» (ТУ 94444-031-17121966-99). Для заготовки лейкофильтрованных отмытых эритроцитов применение данного устройства является более целесообразным, чем использование нового отечественного лейкофильтра «Лейкосеп».
В соответствии с «Руководством по эксплуатации устройства» в контейнер с ЭМ, полученной из консервированной донорской крови 1-2 суток хранения (снятия лейкотромбослоя не требуется), вводили 50-100 мл изотонического раствора натрия хлорида и тщательно перемешивали с эритроцитной средой. Через фильтровальный узел пропускали промывную жидкость (изотонический раствор натрия хлорида) из соответствующей емкости в объеме около 150 мл, стараясь полностью вытеснить из корпуса фильтра воздух и промывая его. Затем корпус фильтра заполняли эритроцитной средой, вытесняя из него промывной раствор в стерильную емкость, которую затем удаляли.
Лейкофильтрацию выполняли со скоростью 44,7±7,67 мл/мин. Процедуру фильтрования заканчивали вытеснением остатков фильтруемой среды из корпуса лейкофильтра и фильтровального материала (пропуская 50 мл изотонического раствора натрия хлорида) в контейнер с профильтрованной средой. Затем последний герметизировали и отсоединяли.
Для оценки эффективности описанной выше технологии нами изучены cодержание лейкоцитов в исходной ЭМ (в камере Горяева), остаточных лейкоцитов (в камере Nageotte) и остаточного белка плазмы в полученной эритровзвеси (c использованием реактива Ларионовой), а также потери эритроцитов в процессе лейкофильтрации и отмывания. Контролем служили отмытые эритроциты без предварительной лейкофильтрации.
Результаты и обсуждение
Предварительное добавление изотонического раствора натрия хлорида в ЭМ, его использование для промывания фильтровального материала и для вытеснения из лейкофильтра остатков среды после фильтрования, несомненно, способствуют эффективности дальнейшего отмывания профильтрованной среды от белков плазмы. Промывание устройства изотоническим раствором натрия хлорида до и после пропускания через него ЭМ не только не усложняет заготовку предлагаемой среды, но и обеспечивает уменьшение ее потерь (за счет вымывания эритроцитов из корпуса фильтра и соединительных трубок).
Результаты исследования содержания остаточных лейкоцитов и белков плазмы в опытной и контрольной сериях представлены в таблице 1.
Таблица 1
Содержание лейкоцитов и белков плазмы во взвесях эритроцитов
в опытной (профильтрованные отмытые) и контрольной (отмытые)
сериях экспериментов в день заготовки
Что такое отмытые эритроциты
Эритроцитная масса, обедненная лейкоцитами и тромбоцитами (отмытые эритроциты — ОЭ), представляет собой ЭМ, лишенную плазмы, а также лейкоцитов и тромбоцитов путем 1—5-кратного повторного добавления физиологического раствора и удаления надосадочной жидкости после центрифугирования.
В процессе отмывания удаляются белки плазмы, лейкоциты, тромбоциты, микроагрегаты клеток и стромы, разрушенные при хранении клеточных компонентов.
Отмытые эритроциты, как правило, готовят из ЭМ небольших (до 10 дней) сроков хранения, в связи с чем они обладают достаточной кислородтранспортной функцией.
ЭМ отмывают в тех же пластиковых контейнерах, в которых она хранится. Для отмывания используют ЭМ любых сроков годности. Для детей, кардиососудистых больных предпочтение отдается эритроцитам малых сроков хранения (до 7 дней). ЭМ отмывают 1—5 раз стерильным физиологическим раствором. После каждого добавления физиологического раствора ЭМ осаждают методом центрифугирования. Существуют специальные приборы, разработанные для отмывания ЭМ. Для этих целей можно использовать и аппарат «Селл-север» (Cell-saver). Отмытые эритроциты сохраняются до использования во взвеси 100— 150 мл физиологического раствора с гематокритом 0,70—0,80 (70—80 %).
Поскольку отмывание ЭМ производится в открытой системе, то срок хранения до использования (из-за риска бактериального загрязнения) может быть не более 24 ч при +1—6 °С.
Отмытую ЭМ применяют у пациентов, сенсибилизированных предыдущими гемотрансфузиями к плазменным факторам или антигенам лейкоцитов и тромбоцитов. Отмытую ЭМ готовят в отделении трансфузиологии по заявке на пациента из 5—10 доз крови, подобранных для больного в пробе Кумбса.
При отмывании, даже при тщательном подходе ко всем этапам процедуры, происходит удаление с отмывающим раствором части эритроцитов. Это обстоятельство надо иметь в виду и назначать больному на 10—20 % больший объем отмытых ЭМ, чем при назначении нативной ЭМ.
Необходимо помнить, что трансфузия отмытых эритроцитов хоть и снижает риск заражения больного гематогенными инфекциями, но полностью не избавляет ЭМ от вирусов гепатита, ВИЧ и др. инфекций. Кроме того, отмывание полностью не избавляет от клеток лейкоцитарного ряда, что сохраняет опасность у иммуноскомпрометированных больных провокации реакции «трансплантат-против-хозяина».
Отмытые эритроциты хранят при температуре +4—6 С. отмытых эритроцитов, взвешенные в 0,9 %-ном растворе натрия хлорида, подлежат переливанию в течение 24 ч с момента приготовления. Использование в качестве консерванта препарата модежель позволяет продлить срок хранения ОЭ до 72 ч.
Показания к применению:
• анемии различной этиологии, сопровождающиеся сенсибилизацией реципиента к антигенам белков плазмы, лейкоцитов и тромбоцитов в результате повторных переливаний крови или беременности;
• синдром гомологичной крови (как элемент комплексной терапии);
• возмещение кровопотери у больных-аллергиков (бронхиальная астма и др.) с целью профилактики анафилактических реакций.
В соответствии с современными требованиями ЭМ, так же как и цельную консервированную донорскую кровь, в период заготовки или перед трансфузией освобождают от остатков лейкоцитов.
Что такое отмытые эритроциты
Установлено, что причиной большинства трансфузионных реакций негемолитического типа у больных, имевших в анамнезе множественные трансфузии компонентов крови, а также у женщин, имевших беременности, являются изоантитела к антигенам лейкоцитов (в частности, HLA), которые, несомненно, снижают эффект не только перелитого компонента, но и всей лечебной процедуры.
В среднем в 450—500 мл консервированной крови или эритроцитов содержится (2—3) х 10 лейкоцитов и большое количество тромбоцитов. Стандартный фильтр крови с диаметром пор 170 мк не задерживает и не удаляет лейкоциты.
В отделениях трансфузиологии или на станциях переливания крови лейкоциты и тромбоциты могут быть удалены из консервированной крови или ЭМ методом отмывания (центрифужным или на специальных автоматических машинах). Размороженная ЭМ, готовая к использованию, также практически не содержит лейкоцитов и тромбоцитов.
Однако, как было сказано выше, срок хранения отмытых эритроцитов в солевом растворе — всего 24 ч. Кроме того, в отмытой солевым раствором ЭМ через 24 ч увеличивается уровень свободного гемоглобина, т. е. происходит гемолиз эритроцитов, который нарастает с течением времени и к третьему дню более 35—40 % эритроцитов разрушаются. Срок жизни отмытой ЭМ можно увеличить до 3—4 и более суток, если в пакет после отмывания сразу добавить (при условии выполнения всех процедур в условиях, обеспечивающих стерильность) 50—100 мл раствора модежеля — декальцинированный модифицированный желатиноль.
Удаление лейкоцитов с целью профилактики сенсибилизации пациентов, получающих компоненты крови, можно обеспечить использованием специальных лейкоцитарных фильтров. Приказ министра МЗ РФ № 311 от 04.08.2000 предписывает внедрение в практику лечебно-профилактических учреждений и учреждений службы крови методов фильтрации трансфузионных сред. Лейкоцитарные фильтры позволяют удалять более 99 % лейкоцитов.
Лейкоцитарные фильтры применяют для подготовки эритроцитарной массы:
• больным, имеющим антилейкоцитарные антитела вследствие сенсибилизации предыдущими гемотрансфузиями;
• женщинам, имевшим многократные беременности,
• в целях профилактики больным, которым планируются многократные трансфузии компонентов крови.
Использование лейкоцитарных фильтров позволяет значительно уменьшить число посттрансфузионных реакций негемолитического типа и тем самым повысить эффект лечебных процедур.
Размороженная и отмытая эритроцитная взвесь
Наряду с консервированием крови при положительных температурах существует метод консервирования компонентов крови при отрицательных температурах.
Метод замораживания и хранения эритроцитов при низких температурах позволяет получить после размораживания и отмывания функционально полноценные эритроциты. Для предотвращения гибели или повреждения клеток при замораживании к ним в определенных соотношениях добавляют специальные химические агенты (криопротекторы, например: глицерин), которые при оттаивании эритроцитов должны быть удалены. Как правило, к замораживанию подготавливают ЭМ малых сроков хранения (не более 5—6 суток). Замораживание ЭМ в растворе глицерина выполняют в специальных металлических сосудах при низких температурах: —65 или —200 °С. Температурный режим и программа замораживания зависят от концентрации криопротектора. В замороженном состоянии эритроциты могут находиться до 10 лет.
После оттаивания эритроцитарной массы отмывают специальными растворами от глицерина и ресуспензируют в физиологическом растворе. Готовая к употреблению ЭМ должна иметь гематокрит в пределах 70—80 %. Поскольку часть процедур при приготовлении отмытых размороженных эритроцитов происходит в условиях разгерметизации стерильных систем, то срок хранения готовой продукции — не более 24 ч при +1—6 °С.
Метод замораживания эритроцитарной массы позволяет накопить и хранить продолжительное время эритроциты доноров редких групп крови и достаточно оперативно представлять их после размораживания и отмывания тем пациентам, которые в них нуждаются.
Возможность сохранять функционально полноценные эритроциты более длительно, чем при обычных условиях, открыло возможность дробно заготавливать, замораживать и хранить достаточные объемы аутологичной крови, которую используют в период операции для самого больного. Имеются сведения о целесообразности применения метода замораживания, хранения ЭМ доноров, не имеющих антител к цитомегаловирусам, для трансфузии больным, которым переливание компонентов крови, содержащих ЦМВ, противопоказано (иммунокопрометированные больные; пациенты, готовящиеся к трансплантации органов и тканей).
Возможность замораживать и хранить достаточно большие объемы аутоэритроцитов позволяет использовать этот метод для хранения сколь угодно долгое время эритроцитов людей, чья профессия связана с риском механической, химической или радиационной травмы.
Пресс-центр
Отмытые эритроциты
Отмытые эритроциты представляют собой эритроцитную массу, лишенную плазмы, а также лейкоцитов и тромбоцитов путем 1—5-кратного повторного добавления физиологического раствора и удаления надосадочной жидкости после центрифугирования.
В процессе отмывания удаляются белки плазмы, лейкоциты, тромбоциты, микроагрегаты клеток и стромы, разрушенные при хранении клеточных компонентов.
Отмытые эритроциты, как правило, готовят из эритроцитной массы небольших (до 10 дней) сроков хранения, в связи с чем они обладают достаточной кислородтранспортной функцией.
Для детей, кардиососудистых больных предпочтение отдается эритроцитам малых сроков хранения (до 7 дней).
Эритроцитную массу отмывают в тех же пластиковых контейнерах, в которых она хранится. После каждого добавления физиологического раствора эритроциты осаждают методом центрифугирования.
Поскольку отмывание производится в открытой системе, то срок хранения до использования (из-за риска бактериального загрязнения) может быть не более 24 ч при температуре +1+6 °С.
Отмытые эритроциты применяют у пациентов, сенсибилизированных предыдущими гемотрансфузиями к плазменным факторам или антигенам лейкоцитов и тромбоцитов.
В БУ «РСПК» Минздрава Чувашии за 11 месяцев 2020 года было заготовлено более 1000 доз.