Π§ΡΠΎ ΡΠ°ΠΊΠΎΠ΅ ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅ΡΡ Π² Π±ΠΈΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΠΈ
ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅Ρ
Π‘ΠΌΠΎΡΡΠ΅ΡΡ ΡΡΠΎ ΡΠ°ΠΊΠΎΠ΅ «ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅Ρ» Π² Π΄ΡΡΠ³ΠΈΡ ΡΠ»ΠΎΠ²Π°ΡΡΡ :
Π‘ΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅Ρ β Π‘ΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅Ρ: Π‘ΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅Ρ Π² ΠΌΠΎΠ΄ΡΠ»ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΠΎ Π»Π΅Π³ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΠΎΠΉ Π³Π΅ΡΠ΅ΡΠΎΡΡΡΡΠΊΡΡΡΠ΅ Π½Π΅Π»Π΅Π³ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΠΉ ΡΠ»ΠΎΠΉ ΠΏΠΎΠ»ΡΠΏΡΠΎΠ²ΠΎΠ΄Π½ΠΈΠΊΠ° Ρ Π±ΠΎΠ»ΡΡΠΎΠΉ ΡΠΈΡΠΈΠ½ΠΎΠΉ Π·Π°ΠΏΡΠ΅ΡΡΠ½Π½ΠΎΠΉ Π·ΠΎΠ½Ρ, ΡΠ°Π·Π΄Π΅Π»ΡΡΡΠΈΠΉ Π΄Π²ΡΠΌΠ΅ΡΠ½ΡΠΉ ΡΠ»Π΅ΠΊΡΡΠΎΠ½Π½ΡΠΉ (Π΄ΡΡΠΎΡΠ½ΡΠΉ) Π³Π°Π· ΠΈ Π»Π΅Π³ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΠΉ ΡΠ»ΠΎΠΉ Ρ Π΄ΠΎΠ½ΠΎΡΠ°ΠΌΠΈ (Π°ΠΊΡΠ΅ΠΏΡΠΎΡΠ°ΠΌΠΈ). Π‘ΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅Ρ (ΠΠΠ β¦ ΠΠΈΠΊΠΈΠΏΠ΅Π΄ΠΈΡ
ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅Ρ β ΡΡΡ., ΠΊΠΎΠ» Π²ΠΎ ΡΠΈΠ½ΠΎΠ½ΠΈΠΌΠΎΠ²: 2 β’ ΡΠ°Π·Π΄Π΅Π»ΠΈΡΠ΅Π»Ρ (8) β’ ΡΠ°ΠΌΠΊΠ° (17) Π‘Π»ΠΎΠ²Π°ΡΡ ΡΠΈΠ½ΠΎΠ½ΠΈΠΌΠΎΠ² ASIS. Π.Π. Π’ΡΠΈΡΠΈΠ½. 2013 β¦ Π‘Π»ΠΎΠ²Π°ΡΡ ΡΠΈΠ½ΠΎΠ½ΠΈΠΌΠΎΠ²
Π‘ΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅Ρ β ΠΈΠ΄ΡΡΠ°Ρ ΠΏΠΎ ΠΏΠ΅ΡΠΈΠΌΠ΅ΡΡΡ ΡΡΠ΅ΠΊΠ»ΠΎΠΏΠ°ΠΊΠ΅ΡΠ° ΠΌΠ΅ΠΆΠ΄Ρ ΡΡΠ΅ΠΊΠ»Π°ΠΌΠΈ ΡΠΎΠ½ΠΊΠ°Ρ ΠΏΠΎΠ»Π°Ρ ΡΠ°ΠΌΠΊΠ°. ΠΠ½ΡΡΡΠΈ ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅ΡΠ° Π½Π°Ρ ΠΎΠ΄ΠΈΡΡΡ Π²Π»Π°Π³ΠΎΠΏΠΎΠ³Π»ΠΎΡΠΈΡΠ΅Π»Ρ. ΠΡΡΠΎΡΠ½ΠΈΠΊ: Π‘Π»ΠΎΠ²Π°ΡΡ Π°ΡΡ ΠΈΡΠ΅ΠΊΡΡΡΠ½ΠΎ ΡΡΡΠΎΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΡΡ ΡΠ΅ΡΠΌΠΈΠ½ΠΎΠ² β¦ Π‘ΡΡΠΎΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΡΠΉ ΡΠ»ΠΎΠ²Π°ΡΡ
Π‘ΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅Ρ β β ΠΈΠ΄ΡΡΠ°Ρ ΠΏΠΎ ΠΏΠ΅ΡΠΈΠΌΠ΅ΡΡΡ ΡΡΠ΅ΠΊΠ»ΠΎΠΏΠ°ΠΊΠ΅ΡΠ° ΠΌΠ΅ΠΆΠ΄Ρ ΡΡΠ΅ΠΊΠ»Π°ΠΌΠΈ ΡΠΎΠ½ΠΊΠ°Ρ ΠΏΠΎΠ»Π°Ρ ΡΠ°ΠΌΠΊΠ°. ΠΠ½ΡΡΡΠΈ ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅ΡΠ° Π½Π°Ρ ΠΎΠ΄ΠΈΡΡΡ Π²Π»Π°Π³ΠΎΠΏΠΎΠ³Π»ΠΎΡΠΈΡΠ΅Π»Ρ β¦ Π‘Π»ΠΎΠ²Π°ΡΡ ΡΡΡΠΎΠΈΡΠ΅Π»Ρ
Π‘ΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅Ρ ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅ΡΠ½Π°Ρ ΠΠΠ β Π‘ΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅Ρ, ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅ΡΠ½Π°Ρ ΠΠΠ * ΡΠΏΡΠΉΡΠ°Ρ, ΡΠΏΡΠΉΡΠ°ΡΠ½Π°Ρ ΠΠΠ * spacer or s. DNA 1. ΠΠ΅ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠ±ΠΈΡΡΠ΅ΠΌΠ°Ρ ΠΏΠΎΠ²ΡΠΎΡΡΡΡΠ°ΡΡΡ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΡ ΡΡΠΊΠ°ΡΠΈΠΎΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΡ ΠΈ Π½Π΅ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΡ Π²ΠΈΡΡΡΠ½ΡΡ Π³Π΅Π½ΠΎΠΌΠΎΠ², ΡΠ»Π°Π½ΠΊΠΈΡΡΡΡΠΈΡ ΡΡΠ½ΠΊΡΠΈΠΎΠ½Π°Π»ΡΠ½ΡΠ΅ Π³Π΅Π½Ρ. Π‘. ΡΠ°Π·Π΄Π΅Π»ΡΠ΅Ρ ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠ±ΠΈΡΡΠ΅ΠΌΡΠ΅ ΡΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΡβ¦ β¦ ΠΠ΅Π½Π΅ΡΠΈΠΊΠ°. ΠΠ½ΡΠΈΠΊΠ»ΠΎΠΏΠ΅Π΄ΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠΉ ΡΠ»ΠΎΠ²Π°ΡΡ
Π‘ΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅Ρ (ΡΠΈΠ·ΠΈΠΊΠ°) β Π£ ΡΡΠΎΠ³ΠΎ ΡΠ΅ΡΠΌΠΈΠ½Π° ΡΡΡΠ΅ΡΡΠ²ΡΡΡ ΠΈ Π΄ΡΡΠ³ΠΈΠ΅ Π·Π½Π°ΡΠ΅Π½ΠΈΡ, ΡΠΌ. Π‘ΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅Ρ. Π‘ΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅Ρ (Π°Π½Π³Π». spacer) Π² ΠΌΠΎΠ΄ΡΠ»ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΠΎ Π»Π΅Π³ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΠΎΠΉ Π³Π΅ΡΠ΅ΡΠΎΡΡΡΡΠΊΡΡΡΠ΅ Π½Π΅Π»Π΅Π³ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΠΉ ΡΠ»ΠΎΠΉ ΠΏΠΎΠ»ΡΠΏΡΠΎΠ²ΠΎΠ΄Π½ΠΈΠΊΠ° Ρ Π±ΠΎΠ»ΡΡΠΎΠΉ ΡΠΈΡΠΈΠ½ΠΎΠΉ Π·Π°ΠΏΡΠ΅ΡΡΠ½Π½ΠΎΠΉ Π·ΠΎΠ½Ρ, ΡΠ°Π·Π΄Π΅Π»ΡΡΡΠΈΠΉ Π΄Π²ΡΠΌΠ΅ΡΠ½ΡΠΉ ΡΠ»Π΅ΠΊΡΡΠΎΠ½Π½ΡΠΉβ¦ β¦ ΠΠΈΠΊΠΈΠΏΠ΅Π΄ΠΈΡ
ΠΠ΅ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠ±ΠΈΡΡΠ΅ΠΌΡΠΉ ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅Ρ β * Π½Π΅ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΡΠ±ΡΡΡΠ΅ΠΌΡ ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅Ρ * non transcribed spacer ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΡ ΠΠΠ, ΠΎΡΠ΄Π΅Π»ΡΡΡΠ°Ρ ΡΠ°Π½Π΄Π΅ΠΌΠ½ΠΎ ΡΠ°ΡΠΏΠΎΠ»ΠΎΠΆΠ΅Π½Π½ΡΠ΅ ΠΊΠΎΠΏΠΈΠΈ ΡΠΊΡΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΡΡΡΡΠ΅Π³ΠΎΡΡ Π³Π΅Π½Π° ΠΈΠ»ΠΈ ΡΠΊΡΠΏΡΠ΅ΡΡΠΈΡΡΡΡΡΡΡΡ Π΅Π΄ΠΈΠ½ΠΈΡΡ ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΈΠΈ, Π½ΠΎ ΡΠ°ΠΌΠ° Π½Π΅ ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠ±ΠΈΡΡΠ΅ΡΡΡ. ΠΠ±Π»Π°ΡΡΡ ΠΌΠ΅ΠΆΠ΄Ρ ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠ±ΠΈΡΡΠ΅ΠΌΡΠΌΠΈβ¦ β¦ ΠΠ΅Π½Π΅ΡΠΈΠΊΠ°. ΠΠ½ΡΠΈΠΊΠ»ΠΎΠΏΠ΅Π΄ΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠΉ ΡΠ»ΠΎΠ²Π°ΡΡ
ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠ±ΠΈΡΡΡΡΠΈΠΉΡΡ ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅Ρ β transcribed spacer ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠ±ΠΈΡΡΡΡΠΈΠΉΡΡ ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅Ρ. Π£ΡΠ°ΡΡΠΎΠΊ ΠΊΠ»Π°ΡΡΠ΅ΡΠ° ΡΠΈΠ±ΠΎΡΠΎΠΌΠ½ΠΎΠΉ ΠΠΠ, ΡΠ°Π·Π΄Π΅Π»ΡΡΡΠΈΠΉ Π³Π΅Π½Ρ Π΄Π²ΡΡ Π²ΡΡΠΎΠΊΠΎΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»ΡΡΠ½ΡΡ ΡΠ ΠΠ; Π’.Ρ. Π²ΡΡΠ΅Π·ΡΠ²Π°Π΅ΡΡΡ Π² ΠΏΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅ ΡΠΎΠ·ΡΠ΅Π²Π°Π½ΠΈΡ ΡΠΎΠ±ΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΠΎ ΡΠ ΠΠ; Ρ Π½Π΅ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΡ ΠΎΡΠ³Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΠΎΠ² (Π±Π°ΠΊΡΠ΅ΡΠΈΠΈ ΠΈ Π΄Ρ.) Π² ΡΠΎΡΡΠ°Π² Π’.Ρ. ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρβ¦ β¦ ΠΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»ΡΡΠ½Π°Ρ Π±ΠΈΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΡ ΠΈ Π³Π΅Π½Π΅ΡΠΈΠΊΠ°. Π’ΠΎΠ»ΠΊΠΎΠ²ΡΠΉ ΡΠ»ΠΎΠ²Π°ΡΡ.
ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠ±ΠΈΡΡΡΡΠΈΠΉΡΡ ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅Ρ β Π£ΡΠ°ΡΡΠΎΠΊ ΠΊΠ»Π°ΡΡΠ΅ΡΠ° ΡΠΈΠ±ΠΎΡΠΎΠΌΠ½ΠΎΠΉ ΠΠΠ, ΡΠ°Π·Π΄Π΅Π»ΡΡΡΠΈΠΉ Π³Π΅Π½Ρ Π΄Π²ΡΡ Π²ΡΡΠΎΠΊΠΎΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»ΡΡΠ½ΡΡ ΡΠ ΠΠ; Π’.Ρ. Π²ΡΡΠ΅Π·ΡΠ²Π°Π΅ΡΡΡ Π² ΠΏΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅ ΡΠΎΠ·ΡΠ΅Π²Π°Π½ΠΈΡ ΡΠΎΠ±ΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΠΎ ΡΠ ΠΠ; Ρ Π½Π΅ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΡ ΠΎΡΠ³Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΠΎΠ² (Π±Π°ΠΊΡΠ΅ΡΠΈΠΈ ΠΈ Π΄Ρ.) Π² ΡΠΎΡΡΠ°Π² Π’.Ρ. ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ Π²Ρ ΠΎΠ΄ΠΈΡΡ ΠΊΠΎΠ΄ΠΈΡΡΡΡΠ°Ρ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΡ,β¦ β¦ Π‘ΠΏΡΠ°Π²ΠΎΡΠ½ΠΈΠΊ ΡΠ΅Ρ Π½ΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠ³ΠΎ ΠΏΠ΅ΡΠ΅Π²ΠΎΠ΄ΡΠΈΠΊΠ°
Π’ΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠ±ΠΈΡΡΡΡΠΈΠΉΡΡ ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅Ρ β * ΡΠΏΡΠΉΡΠ°Ρ, ΡΠΊΡ ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΡΠ±ΡΡΡΠ΅ΡΡΠ° * transcribed spacer ΡΡΠ°ΡΡΠΎΠΊ ΠΊΠ»Π°ΡΡΠ΅ΡΠ° ΡΠΈΠ±ΠΎΡΠΎΠΌΠ½ΠΎΠΉ ΠΠΠ, ΡΠ°Π·Π΄Π΅Π»ΡΡΡΠΈΠΉ Π³Π΅Π½Ρ Π΄Π²ΡΡ Π²ΡΡΠΎΠΊΠΎΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»ΡΡΠ½ΡΡ ΡΠ ΠΠ (), ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠΉ Π²ΡΡΠ΅Π·Π°Π΅ΡΡΡ Π² ΠΏΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅ ΡΠΎΠ·ΡΠ΅Π²Π°Π½ΠΈΡ ΡΠΎΠ±ΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΠΎ ΡΠ ΠΠ. Π£ Π±Π°ΠΊΡΠ΅ΡΠΈΠΉ ΠΈ Π½Π΅ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΡ Π΄Ρ. ΠΎΡΠ³Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΠΎΠ² Π’. Ρ. ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρβ¦ β¦ ΠΠ΅Π½Π΅ΡΠΈΠΊΠ°. ΠΠ½ΡΠΈΠΊΠ»ΠΎΠΏΠ΅Π΄ΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠΉ ΡΠ»ΠΎΠ²Π°ΡΡ
Π£ΠΌΠ½ΡΠ΅ Π½ΠΎΠΆΠ½ΠΈΡΡ Π΄Π»Ρ ΠΠΠ
ΠΠ°ΠΊΡΠ΅ΡΠΈΠΈ ΠΈ Π°ΡΡ Π΅ΠΈ Π½Π΅ ΠΈΠΌΠ΅ΡΡ ΡΠ°ΠΊΠΎΠΉ ΠΈΠΌΠΌΡΠ½Π½ΠΎΠΉ ΡΠΈΡΡΠ΅ΠΌΡ, ΠΊΠ°ΠΊ ΠΌΡ Ρ Π²Π°ΠΌΠΈ, β ΡΡΠΎ Π² ΠΏΡΠΈΠ½ΡΠΈΠΏΠ΅ Π½Π΅Π²ΠΎΠ·ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ, Ρ Π½Π°Ρ Π·Π° ΠΈΠΌΠΌΡΠ½ΠΈΡΠ΅Ρ ΠΎΡΠ²Π΅ΡΠ°Π΅Ρ ΠΌΠ½ΠΎΠΆΠ΅ΡΡΠ²ΠΎ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΎΠΊ, Π° Π±Π°ΠΊΡΠ΅ΡΠΈΡ ΡΡΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠΊΠ»Π΅ΡΠΎΡΠ½ΠΎΠ΅. ΠΠ΄Π½Π°ΠΊΠΎ Π±Π°ΠΊΡΠ΅ΡΠΈΠΈ Π½Π΅ Π±Π΅Π·Π·Π°ΡΠΈΡΠ½Ρ ΠΏΡΠΎΡΠΈΠ² Π²ΠΈΡΡΡΠΎΠ²-Π±Π°ΠΊΡΠ΅ΡΠΈΠΎΡΠ°Π³ΠΎΠ² ΠΈ Π΄ΡΡΠ³ΠΈΡ ΠΏΠ°ΡΠΎΠ³Π΅Π½ΠΎΠ². Π‘ΠΈΡΡΠ΅ΠΌΠ° ΡΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠ² Π³Π΅Π½ΠΎΠΌΠ½ΠΎΠΉ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ, Π½Π°Π·ΡΠ²Π°Π΅ΠΌΠ°Ρ CRISPR, ΠΈ Π°ΡΡΠΎΡΠΈΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΠ΅ Ρ Π½Π΅ΠΉ Π±Π΅Π»ΠΊΠΈ Cas ΠΏΠΎΠΌΠΎΠ³Π°ΡΡ ΠΈΠΌ ΡΠ°ΡΠΏΠΎΠ·Π½Π°Π²Π°ΡΡ ΠΈ ΡΠ½ΠΈΡΡΠΎΠΆΠ°ΡΡ ΡΡΠΆΠ΅ΡΠΎΠ΄Π½ΡΠΉ Π³Π΅Π½Π΅ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠΉ ΠΌΠ°ΡΠ΅ΡΠΈΠ°Π».
Π 1987 Π³ΠΎΠ΄Ρ Π² Π³Π΅Π½ΠΎΠΌΠ΅ ΠΊΠΈΡΠ΅ΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΏΠ°Π»ΠΎΡΠΊΠΈ Escherichia coli Π±ΡΠ» ΠΎΠ±Π½Π°ΡΡΠΆΠ΅Π½ Π·Π°Π³Π°Π΄ΠΎΡΠ½ΡΠΉ ΡΡΠ°ΡΡΠΎΠΊ, ΡΠΎΡΡΠΎΡΡΠΈΠΉ ΠΈΠ· ΠΌΠ½ΠΎΠ³ΠΎΡΠΈΡΠ»Π΅Π½Π½ΡΡ ΠΏΠΎΠ²ΡΠΎΡΠΎΠ² (A. Nakata et al., Journal of Bacteriology, 1989, 171, 3553β3556). Π€ΡΠ½ΠΊΡΠΈΡ ΡΡΠΎΠ³ΠΎ ΡΡΠ°ΡΡΠΊΠ°, Π½Π°Π·Π²Π°Π½Π½ΠΎΠ³ΠΎ CRISPR-Π»ΠΎΠΊΡΡΠΎΠΌ (ΠΏΡΠΎΠΈΠ·Π½ΠΎΡΠΈΡΡΡ Β«ΠΊΡΠΈΡΠΏΠ΅ΡΒ»), Π΄ΠΎΠ»Π³ΠΎΠ΅ Π²ΡΠ΅ΠΌΡ ΠΎΡΡΠ°Π²Π°Π»Π°ΡΡ Π·Π°Π³Π°Π΄ΠΎΡΠ½ΠΎΠΉ. ΠΠΎ Π² 2005 Π³ΠΎΠ΄Ρ ΡΡΠ°Π·Ρ ΡΡΠΈ Π³ΡΡΠΏΠΏΡ ΡΠΎΠΎΠ±ΡΠΈΠ»ΠΈ, ΡΡΠΎ ΡΠ°Π·Π΄Π΅Π»ΡΡΡΠΈΠ΅ ΡΡΠΈ ΠΏΠΎΠ²ΡΠΎΡΡ ΠΏΡΠΎΠΌΠ΅ΠΆΡΡΠΎΡΠ½ΡΠ΅ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ Π·Π°ΡΠ°ΡΡΡΡ Π±ΡΠ²Π°ΡΡ ΠΈΠ΄Π΅Π½ΡΠΈΡΠ½Ρ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΡΠΌ, Π½Π°ΠΉΠ΄Π΅Π½Π½ΡΠΌ Π² Π³Π΅Π½ΠΎΠΌΠ°Ρ Π±Π°ΠΊΡΠ΅ΡΠΈΠΎΡΠ°Π³ΠΎΠ² ΠΈ Π² ΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠΈΠ΄Π°Ρ . (ΠΠ»Π°Π·ΠΌΠΈΠ΄Ρ β ΠΊΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π²ΡΠ΅ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»Ρ ΠΠΠ, ΠΏΡΡΠ΅ΡΠ΅ΡΡΠ²ΡΡΡΠΈΠ΅ ΠΈΠ· ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠΉ Π±Π°ΠΊΡΠ΅ΡΠΈΠ°Π»ΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΊΠΈ Π² Π΄ΡΡΠ³ΡΡ. Π‘ ΠΈΡ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ Π±Π°ΠΊΡΠ΅ΡΠΈΠΈ ΠΎΠ±ΠΌΠ΅Π½ΠΈΠ²Π°ΡΡΡΡ ΠΏΠΎΠ»Π΅Π·Π½ΡΠΌΠΈ Π³Π΅Π½Π°ΠΌΠΈ, Π½Π°ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅Ρ ΡΡΡΠΎΠΉΡΠΈΠ²ΠΎΡΡΠΈ ΠΊ Π°Π½ΡΠΈΠ±ΠΈΠΎΡΠΈΠΊΠ°ΠΌ, Π½ΠΎ, Ρ Π΄ΡΡΠ³ΠΎΠΉ ΡΡΠΎΡΠΎΠ½Ρ, Π½Π΅ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠ΅ ΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠΈΠ΄Ρ ΠΎΠ±Π»Π°Π΄Π°ΡΡ ΡΠ΅ΡΡΠ°ΠΌΠΈ Β«ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΊΡΠ° ΡΠ³ΠΎΠΈΡΡΠΈΡΠ½ΡΡ Π³Π΅Π½ΠΎΠ²Β» β ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΡΡ Π±Π°ΠΊΡΠ΅ΡΠΈΠ°Π»ΡΠ½ΡΡ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΊΡ ΠΊΠ°ΠΊ ΠΊΠΎΠΏΠΈΡΡΡΡΠ΅Π΅ ΡΡΡΡΠΎΠΉΡΡΠ²ΠΎ, ΡΠ°ΠΊΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈ ΠΏΠ°ΡΠ°Π·ΠΈΡΠΈΡΡΡ Π½Π° Π½Π΅ΠΉ.)
ΠΡΠΈ Π΄Π°Π½Π½ΡΠ΅ ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΠΈΠ»ΠΈ ΠΏΡΠ΅Π΄ΠΏΠΎΠ»ΠΎΠΆΠΈΡΡ, ΡΡΠΎ Π»ΠΎΠΊΡΡ CRISPR β ΡΠ°ΡΡΡ ΡΠ°Π½Π΅Π΅ Π½Π΅ ΠΈΠ·Π²Π΅ΡΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΌΠ΅Ρ Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΠ°, ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠΉ ΠΏΡΠ΅Π΄Π½Π°Π·Π½Π°ΡΠ΅Π½ Π΄Π»Ρ Π·Π°ΡΠΈΡΡ Π±Π°ΠΊΡΠ΅ΡΠΈΠΉ ΠΈ Π°ΡΡ Π΅ΠΉ ΠΎΡ ΠΈΠ½ΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠΉ. ΠΠ°Π»ΡΠ½Π΅ΠΉΡΠ°Ρ ΡΡΠ΄ΡΠ±Π° Π·Π°ΡΠΈΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΠΈΡΡΠ΅ΠΌΡ CRISPR/Cas Π΅ΡΠ΅ ΠΈΠ½ΡΠ΅ΡΠ΅ΡΠ½Π΅Π΅ β Π² 2012β2013 Π³ΠΎΠ΄Ρ Π½Π° Π΅Π΅ ΠΎΡΠ½ΠΎΠ²Π΅ Π±ΡΠ»ΠΈ ΠΈΠ·ΠΎΠ±ΡΠ΅ΡΠ΅Π½Ρ Π²ΡΡΠΎΠΊΠΎΡΠΎΡΠ½ΡΠ΅ ΠΈΠ½ΡΡΡΡΠΌΠ΅Π½ΡΡ Π΄Π»Ρ ΡΠ΅Π΄Π°ΠΊΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ Π³Π΅Π½ΠΎΠ², Π° ΡΠ°ΠΊΠΆΠ΅ Π΄Π»Ρ ΡΠΏΡΠ°Π²Π»Π΅Π½ΠΈΡ ΠΈΡ Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡΡ. Π, ΡΡΠ΄Ρ ΠΏΠΎ Π²ΡΠ΅ΠΌΡ, ΡΡΠΎ ΡΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ Π½Π°ΡΠ°Π»ΠΎ Π΅Π΅ ΠΊΠ°ΡΡΠ΅ΡΡ Π² ΡΠΎΠ²ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΠΎΠΉ Π±ΠΈΠΎΡΠ΅Ρ Π½ΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΠΈ.
ΠΠΎΠ»Π»Π΅ΠΊΡΠΈΡ ΡΡΠΎΡΠ΅Π΅Π²
ΠΠ°Π·Π²Π°Π½ΠΈΠ΅ Π»ΠΎΠΊΡΡΠ° CRISPR β ΡΠ°ΠΊΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈ Π΅Π³ΠΎ ΡΠ»ΠΎΠ²Π΅ΡΠ½ΡΠΉ ΠΏΠΎΡΡΡΠ΅Ρ: Β«ΡΠΊΠΎΠΏΠ»Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΠ°Π·Π΄Π΅Π»Π΅Π½Π½ΡΡ ΡΠ΅Π³ΡΠ»ΡΡΠ½ΡΠΌΠΈ ΠΏΡΠΎΠΌΠ΅ΠΆΡΡΠΊΠ°ΠΌΠΈ ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΊΠΈΡ ΡΠΈΠΌΠΌΠ΅ΡΡΠΈΡΠ½ΡΡ ΠΏΠΎΠ²ΡΠΎΡΠΎΠ²Β» (clustered regularly interspaced short palindromic repeats). ΠΠΏΠΈΡΠ°Π½ΠΈΠ΅ Π°Π±ΡΠΎΠ»ΡΡΠ½ΠΎ Π²Π΅ΡΠ½ΠΎΠ΅: ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΊΠΈΠ΅ ΠΏΠΎΠ²ΡΠΎΡΡ ΡΠ΅ΡΠ΅Π΄ΡΡΡΡΡ Ρ Π½Π΅ΠΏΠΎΠ²ΡΠΎΡΡΡΡΠΈΠΌΠΈΡΡ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΡΠΌΠΈ, ΠΊΠ°ΠΊ Π² Π΄Π΅ΡΡΠΊΠΎΠΌ ΡΡΠΈΡΠΊΠ΅ ΠΠ°Π½ΠΈΠΈΠ»Π° Π₯Π°ΡΠΌΡΠ°: Β«Π§ΠΈΠΆ-ΡΡΠ΄ΠΎΠΌΠΎΠΉΠΊΠ°, ΡΠΈΠΆ-ΠΏΠΎΠ»ΠΎΠΌΠΎΠΉΠΊΠ°, ΡΠΈΠΆ-ΠΎΠ³ΠΎΡΠΎΠ΄Π½ΠΈΠΊ, ΡΠΈΠΆ-Π²ΠΎΠ΄ΠΎΠ²ΠΎΠ·. Β» β ΡΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ Π²ΠΌΠ΅ΡΡΠΎ Β«ΡΠΈΠΆΠ°Β» ΠΏΠ°Π»ΠΈΠ½Π΄ΡΠΎΠΌ, ΠΎΠ΄ΠΈΠ½Π°ΠΊΠΎΠ²ΠΎ ΡΠΈΡΠ°ΡΡΠΈΠΉΡΡ Ρ ΠΎΠ±ΠΎΠΈΡ ΠΊΠΎΠ½ΡΠΎΠ². (Π ΠΏΠ°Π»ΠΈΠ½Π΄ΡΠΎΠΌΠ°Ρ Π² ΠΏΠΎΡΠ·ΠΈΠΈ ΠΈ Π² ΠΠΠ ΡΠΌ. ΡΡΠ°ΡΡΡ Π. Π―. ΠΠ΅ΠΉΠ½ΡΠ΅ΡΡΠ° Π² ΡΡΠΎΠΌ ΠΆΠ΅ Π½ΠΎΠΌΠ΅ΡΠ΅). Π ΠΊΠ°ΠΆΠ΄ΠΎΠΌ ΠΊΠΎΠ½ΠΊΡΠ΅ΡΠ½ΠΎΠΌ Π»ΠΎΠΊΡΡΠ΅ Π²ΡΠ΅ ΠΏΠΎΠ²ΡΠΎΡΡ ΠΏΡΠ°ΠΊΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈ ΠΎΠ΄ΠΈΠ½Π°ΠΊΠΎΠ²Ρ ΠΈ ΠΈΠΌΠ΅ΡΡ Π΄Π»ΠΈΠ½Ρ ΠΎΡ 24 Π΄ΠΎ 48 ΠΏΠ°Ρ Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΎΠ². ΠΡΠΎΠΌΠ΅ΠΆΡΡΠΊΠΈ ΡΠ°ΠΊΠΆΠ΅ ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅ΡΠ½ΠΎ ΠΎΠ΄ΠΈΠ½Π°ΠΊΠΎΠ²Ρ ΠΏΠΎ Π΄Π»ΠΈΠ½Π΅ (21β72 ΠΏ. Π½.), Π½ΠΎ Π²Π΅ΡΡΠΌΠ° Π²Π°ΡΠΈΠ°Π±Π΅Π»ΡΠ½Ρ ΠΏΠΎ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ.
Π’Π°ΠΊ Π²ΠΎΡ, ΡΡΠΈ ΠΏΡΠΎΠΌΠ΅ΠΆΡΡΠΎΡΠ½ΡΠ΅ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ, ΠΈΠ»ΠΈ ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅ΡΡ, ΡΠ°ΡΡΠΎ ΠΏΡΠΎΠΈΡΡ ΠΎΠ΄ΡΡ ΠΈΠ· ΠΏΠ»Π°Π·ΠΌΠΈΠ΄ ΠΈ ΡΠ°Π³ΠΎΠ². ΠΠ°ΠΊΡΠ΅ΡΠΈΠΈ, Π²ΡΠΆΠΈΠ²ΡΠΈΠ΅ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅ Π°ΡΠ°ΠΊΠΈ ΡΠ°Π³Π°, Π² ΡΠ΅Π·ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΠ΅ ΡΠ°ΠΊ Π½Π°Π·ΡΠ²Π°Π΅ΠΌΠΎΠΉ Π°Π΄Π°ΠΏΡΠ°ΡΠΈΠΈ ΠΏΠΎΠΏΠΎΠ»Π½ΡΡΡ ΡΠ²ΠΎΠΉ CRISPR Π·Π° ΡΡΠ΅Ρ ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅ΡΠΎΠ², ΠΈΠ΄Π΅Π½ΡΠΈΡΠ½ΡΡ Π½Π΅Π±ΠΎΠ»ΡΡΠΈΠΌ Β«ΡΡΠΎΡΠ΅ΠΉΠ½ΡΠΌΒ» ΡΡΠ°ΡΡΠΊΠ°ΠΌ ΠΠΠ ΡΠ°Π³Π° (R. Barrangou et al. & P. Horvath, Science, 2007, 315, 1709β1712). Π Π·Π½Π°ΡΠΈΡ, ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅ΡΠ½ΡΠ΅ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ ΠΌΠ°ΡΡΠΈΠ²Π° CRISPR β ΡΡΠΎ ΠΏΠ°ΠΌΡΡΡ Π±Π°ΠΊΡΠ΅ΡΠΈΠΈ-Ρ ΠΎΠ·ΡΠΈΠ½Π° ΠΎ Π²ΠΈΡΡΡΠ½ΡΡ ΠΈΠ½ΡΠ΅ΠΊΡΠΈΡΡ ΠΈ Π²ΡΡΡΠ΅ΡΠ°Ρ Ρ ΠΈΠ½ΠΎΡΠΎΠ΄Π½ΡΠΌ Π³Π΅Π½Π΅ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠΌ ΠΌΠ°ΡΠ΅ΡΠΈΠ°Π»ΠΎΠΌ.
Π Π»ΠΎΠΊΡΡΡ CRISPR ΠΏΡΠΈΠΌΡΠΊΠ°Π΅Ρ Π»ΠΈΠ΄Π΅ΡΠ½Π°Ρ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΡ (Π΄Π»ΠΈΠ½ΠΎΠΉ Π΄ΠΎ 550 ΠΏ. Π½.), Π° ΡΠ°ΠΊΠΆΠ΅ CRISPR-Π°ΡΡΠΎΡΠΈΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΠ΅ Π³Π΅Π½Ρ (CAS), ΠΊΠΎΠ΄ΠΈΡΡΡΡΠΈΠ΅ Π±Π΅Π»ΠΊΠΈ ΡΠ΅ΠΌΠ΅ΠΉΡΡΠ²Π° Cas. ΠΠΈΠ΄Π΅ΡΠ½Π°Ρ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΡ ΠΈΠ³ΡΠ°Π΅Ρ ΡΠΎΠ»Ρ ΠΏΡΠΎΠΌΠΎΡΠΎΡΠ° β ΡΡΠ°ΡΡΠΎΠ²ΠΎΠΉ ΠΏΠ»ΠΎΡΠ°Π΄ΠΊΠΈ, Ρ ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΎΠΉ Π½Π°ΡΠΈΠ½Π°Π΅ΡΡΡ ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΈΡ ΠΌΠ°ΡΡΠΈΠ²Π° CRISPR, ΡΠΎ Π΅ΡΡΡ Β«ΠΏΠ΅ΡΠ΅ΠΏΠΈΡΡΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅Β» ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ Π½Π° Π ΠΠ (ΡΠΈΡ. 1). ΠΡΠΎΠΌΠ΅ ΡΠΎΠ³ΠΎ, Π²ΠΎΠ·ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ, ΡΡΠΎ Π»ΠΈΠ΄Π΅ΡΠ½Π°Ρ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΡ ΡΠ·Π½Π°Π΅Ρ Π±Π΅Π»ΠΊΠΈ, ΡΡΠ°ΡΡΠ²ΡΡΡΠΈΠ΅ Π²ΠΎ Π²ΡΡΡΠ°ΠΈΠ²Π°Π½ΠΈΠΈ Π½ΠΎΠ²ΡΡ ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅ΡΠΎΠ²: ΠΊΠ°ΠΊ Π½ΠΎΠ²ΡΠ΅ ΡΡΠ°ΡΡΠΊΠΈ ΠΠΠ ΠΎΡ Π½Π°ΠΏΠ°Π΄Π°Π²ΡΠΈΡ ΠΌΠΈΠΊΡΠΎΠΎΡΠ³Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΠΎΠ², ΡΠ°ΠΊ ΠΈ Π½ΠΎΠ²ΡΠ΅ ΠΏΠΎΠ²ΡΠΎΡΡ ΠΎΠ±ΡΡΠ½ΠΎ Π²ΡΡΡΠ°ΠΈΠ²Π°ΡΡΡΡ Π½Π° Π³ΡΠ°Π½ΠΈΡΠ΅ ΠΌΠ΅ΠΆΠ΄Ρ Π½Π΅ΠΉ ΠΈ CRISPR (ΡΠΈΡ. 2).
ΠΠ»ΠΈΠ½Π½Π°Ρ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»Π° Π ΠΠ, ΠΊΠΎΡΠΎΡΠ°Ρ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΠ΅ΡΡΡ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅ ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΈΠΈ CRISPR, ΡΠ°Π·ΡΠ΅Π·Π°Π΅ΡΡΡ Π½Π° ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½ΡΡ. ΠΠ½ΠΈ Π½Π°Π·ΡΠ²Π°ΡΡΡΡ CRISPR Π ΠΠ (crΠ ΠΠ), ΠΏΡΠΈΡΠ΅ΠΌ ΠΊΠ°ΠΆΠ΄ΡΠΉ ΡΠΎΠ΄Π΅ΡΠΆΠΈΡ ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅Ρ ΠΈ ΡΠ°ΡΡΡ ΠΏΠΎΠ²ΡΠΎΡΠ°. Π ΠΏΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅ Π½Π°ΡΠ΅Π·ΠΊΠΈ ΡΡΠ°ΡΡΠ²ΡΠ΅Ρ Π½Π΅Π±ΠΎΠ»ΡΡΠ°Ρ Π ΠΠ, ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠ½Π°Ρ ΠΏΠΎΠ²ΡΠΎΡΠ°ΠΌ, β tracrΠ ΠΠ: ΠΎΠ½Π° ΡΠ»ΡΠΆΠΈΡ Β«Π½Π°Π²ΠΎΠ΄ΡΠΈΡΠ΅ΠΉΒ» Π΄Π»Ρ Π±Π΅Π»ΠΊΠ° Cas9, ΠΊ ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΎΠΌΡ ΠΏΠΎΠ΄ΡΠΎΠ΅Π΄ΠΈΠ½ΡΠ΅ΡΡΡ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½Ρ Π ΠΠΠ°Π·Π° III, Π½Π°ΡΠ΅Π·Π°ΡΡΠΈΠΉ Π΄Π»ΠΈΠ½Π½ΡΡ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»Ρ Π ΠΠ. ΠΡΠΏΠΎΠ»Π½ΠΈΠ² ΡΠ²ΠΎΡ ΡΠΎΠ»Ρ, Π ΠΠΠ°Π·Π° III ΡΡ ΠΎΠ΄ΠΈΡ. ΠΡΡΠ°Π΅ΡΡΡ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΊΡ Π΄Π²ΡΡ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ» crΠ ΠΠ ΠΈ tracrΠ ΠΠ Ρ Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠΌ Cas9. ΠΡΠΎΡ Π±Π΅Π»ΠΎΠΊ β Π½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Π°, ΡΠΎ Π΅ΡΡΡ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½Ρ, ΡΠ°Π·ΡΠ΅Π·Π°ΡΡΠΈΠΉ ΠΠΠ. Π‘Π°ΠΌ ΠΏΠΎ ΡΠ΅Π±Π΅ Cas9 Π½Π΅Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π΅Π½, Π½ΠΎ ΠΏΡΠΈ ΡΠ²ΡΠ·ΡΠ²Π°Π½ΠΈΠΈ Ρ tracrΠ ΠΠ Π΅Π³ΠΎ ΡΡΠ΅Ρ ΠΌΠ΅ΡΠ½Π°Ρ ΡΡΡΡΠΊΡΡΡΠ° ΠΈΠ·ΠΌΠ΅Π½ΡΠ΅ΡΡΡ, ΠΈ ΠΎΠ½ ΠΏΡΠΈΠΎΠ±ΡΠ΅ΡΠ°Π΅Ρ ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ±Π½ΠΎΡΡΡ Π²Π·Π°ΠΈΠΌΠΎΠ΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΎΠ²Π°ΡΡ Ρ ΠΠΠ-ΠΌΠΈΡΠ΅Π½ΡΡ β Π·Π°ΡΠ΅Π»ΠΊΠΈΠ²Π°Π΅ΡΡΡ Π½Π° Π΅Π΅ Π΄Π²ΡΡ Π½ΠΈΡΡΡ , ΠΏΡΠ΅Π²ΡΠ°ΡΠ°ΡΡΡ Π² Π½Π΅ΡΡΠΎ ΠΏΠΎΠ΄ΠΎΠ±Π½ΠΎΠ΅ Π·Π°ΠΌΠΊΡ Π·Π°ΡΡΠ΅ΠΆΠΊΠΈ-Β«ΠΌΠΎΠ»Π½ΠΈΠΈΒ».
Π Π·Π°ΡΠ΅ΠΌ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΊΡ crΠ ΠΠ/tracrΠ ΠΠ-Cas9 Π½Π°ΡΠΈΠ½Π°Π΅Ρ ΡΠ°ΡΠΏΡΠ°Π²Ρ Ρ Π²ΡΠ°Π³ΠΎΠΌ: ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅ΡΠ½ΡΠ΅ ΡΡΠ°ΡΡΠΊΠΈ crΠ ΠΠ Π½Π°Ρ ΠΎΠ΄ΡΡ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠ½ΡΠ΅ ΠΈΠΌ ΡΡΠ°ΡΡΠΊΠΈ Π²ΡΠ°ΠΆΠ΅ΡΠΊΠΈΡ Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΈΠ½ΠΎΠ²ΡΡ ΠΊΠΈΡΠ»ΠΎΡ ΠΈ ΠΏΡΠΈΠ½ΠΎΡΡΡ ΠΊ Π½ΠΈΠΌ Π°ΠΊΡΠΈΠ²ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΠ΅ Cas-Π±Π΅Π»ΠΊΠΈ, ΡΠ΅ Π²ΡΠ·ΡΠ²Π°ΡΡ ΠΈΡ ΡΠ°ΡΡΠ΅ΠΏΠ»Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΈ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΡΡΡΡΡ Π΄Π΅Π³ΡΠ°Π΄Π°ΡΠΈΡ. (ΠΡΠΎΡ ΠΌΠ΅Ρ Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌ ΠΎΡΡΠ°ΡΡΠΈ Π½Π°ΠΏΠΎΠΌΠΈΠ½Π°Π΅Ρ Π ΠΠ-ΠΈΠ½ΡΠ΅ΡΡΠ΅ΡΠ΅Π½ΡΠΈΡ ΡΡΠΊΠ°ΡΠΈΠΎΡ, ΡΠΌ. ΡΡΠ°ΡΡΡ Β«ΠΠΈΠ΄ Ρ Π²Π΅ΡΡΠΈΠ½ΡΒ» Π² ΡΡΠΎΠΌ ΠΆΠ΅ Π½ΠΎΠΌΠ΅ΡΠ΅.) Π’Π°ΠΊΠΈΠΌ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠΌ, crΠ ΠΠ Π²ΡΠΏΠΎΠ»Π½ΡΠ΅Ρ ΡΠΎΠ»Ρ ΠΏΡΠΎΠ²ΠΎΠ΄Π½ΠΈΠΊΠ°, Π½Π°ΠΏΡΠ°Π²Π»ΡΡΡΠ΅Π³ΠΎ Π½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Ρ ΠΊ ΡΠ΅Π»ΠΈ, Π·Π° ΡΡΠΎ ΠΎΠ½Π° ΠΈ ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠΈΠ»Π° ΡΠ²ΠΎΠ΅ Π΄ΡΡΠ³ΠΎΠ΅ Π½Π°Π·Π²Π°Π½ΠΈΠ΅: Β«Π ΠΠ-Π³ΠΈΠ΄Β» (ΡΠΈΡ. 3).
Π§ΡΠΎΠ±Ρ Π±Π΅Π»ΠΊΠΈ Cas ΡΠ·Π½Π°Π»ΠΈ ΠΈ Π·Π°ΡΠ΅ΠΌ ΡΠ°ΡΡΠ΅ΠΏΠΈΠ»ΠΈ ΠΎΠΏΠΎΠ·Π½Π°Π½Π½ΡΡ Π ΠΠ-Π³ΠΈΠ΄ΠΎΠΌ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΡ ΠΠΠ, Π½Π΅ΠΏΠΎΡΡΠ΅Π΄ΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΠΎ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅ ΡΠ°ΠΉΡΠ°-ΠΌΠΈΡΠ΅Π½ΠΈ Π΄ΠΎΠ»ΠΆΠ½Π° Π½Π°Ρ ΠΎΠ΄ΠΈΡΡΡΡ ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΊΠ°Ρ (ΠΎΡ ΡΡΠ΅Ρ Π΄ΠΎ Π΄Π΅Π²ΡΡΠΈ Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΎΠ²) ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΡ, Π½Π°Π·ΡΠ²Π°Π΅ΠΌΠ°Ρ PAM β protospacer adjacent motif. Π’Π°ΠΊΠΈΠΌ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠΌ, Π°ΡΠ°ΠΊΡΡΡΡΡ ΡΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ ΡΠ΅ ΡΡΠ°ΡΡΠΊΠΈ Π²ΡΠ°ΠΆΠ΅ΡΠΊΠΎΠΉ ΠΠΠ, ΡΡΠ΄ΠΎΠΌ Ρ ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠΌΠΈ Π½Π°Ρ ΠΎΠ΄ΡΡΡΡ ΡΡΠΈ ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΊΠΈΠ΅ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ. Π£ ΡΠ°Π·Π½ΡΡ Π²ΠΈΠ΄ΠΎΠ² Π±Π°ΠΊΡΠ΅ΡΠΈΠΉ Π ΠΠ ΡΠ°Π·Π»ΠΈΡΠ°ΡΡΡΡ. ΠΡΠ»ΠΈ ΡΡΠ°ΡΡΠΎΠΊ ΠΠΠ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠ΅Π½ crΠ ΠΠ, Π½ΠΎ ΡΡΠ΄ΠΎΠΌ Ρ Π½ΠΈΠΌ Π½Π΅Ρ Π ΠΠ, ΡΠΎ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΊΡ crΠ ΠΠ/tracrΠ ΠΠ-Cas9 Π΅Π³ΠΎ Π½Π΅ ΡΠ°ΡΠΏΠΎΠ·Π½Π°Π΅Ρ. Π£ ΡΡΠΎΠΉ ΠΎΡΠΎΠ±Π΅Π½Π½ΠΎΡΡΠΈ Π΅ΡΡΡ Π±ΠΈΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠ΅ ΠΎΠ±ΡΡΡΠ½Π΅Π½ΠΈΠ΅, ΠΏΠΎΠΊΠ° ΡΠΊΡΠΏΠ΅ΡΠΈΠΌΠ΅Π½ΡΠ°Π»ΡΠ½ΠΎ Π½Π΅ ΠΏΠΎΠ΄ΡΠ²Π΅ΡΠΆΠ΄Π΅Π½Π½ΠΎΠ΅. ΠΠ΅Π»ΠΎ Π² ΡΠΎΠΌ, ΡΡΠΎ Π² Π»ΠΎΠΊΡΡΠ΅ CRISPR Π½Π°ΡΡΠ΄Ρ ΡΠΎ ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅ΡΠ°ΠΌΠΈ, ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠ½ΡΠΌΠΈ ΠΈΠ½ΠΎΡΠΎΠ΄Π½ΠΎΠΉ ΠΠΠ, Π²ΡΡΡΠ΅ΡΠ°ΡΡΡΡ ΠΈ ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅ΡΡ, Π½Π°ΡΠ΅Π»Π΅Π½Π½ΡΠ΅ Π½Π° ΡΠΎΠ±ΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΡΡ ΠΠΠ Π±Π°ΠΊΡΠ΅ΡΠΈΠΈ. Π ΡΠ°ΠΊΠΈΡ ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅ΡΠΎΠ²-Β«ΡΠ°ΠΌΠΎΡΠ±ΠΈΠΉΡΒ» Π½Π΅ΠΌΠ°Π»ΠΎ β ΠΏΠΎΡΡΠ΄ΠΊΠ° 20%. ΠΠ΅Π½Ρ ΡΡΠΈ, ΠΎΠ΄Π½Π°ΠΊΠΎ, Π½Π΅ ΡΠ°Π·ΡΡΡΠ°ΡΡΡΡ, Π²ΠΎΠ·ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ, ΠΈΠ·-Π·Π° ΠΎΡΡΡΡΡΡΠ²ΠΈΡ ΡΡΠ΄ΠΎΠΌ Ρ Π½ΠΈΠΌΠΈ PAM (PLoS Genetics, 2013, 9(9), e1003742, DOI:10.1371/journal.pgen.1003742). Π ΠΎΠ»Ρ ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅ΡΠΎΠ², ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠ½ΡΡ Β«ΡΠ²ΠΎΠ΅ΠΉΒ» ΠΠΠ, ΠΏΡΠ΅Π΄ΡΡΠΎΠΈΡ Π΅ΡΠ΅ Π²ΡΡΡΠ½ΠΈΡΡ. ΠΠΎΠ·ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ, Π±Π°ΠΊΡΠ΅ΡΠΈΡ Ρ ΠΈΡ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ ΡΠ΅Π³ΡΠ»ΠΈΡΡΠ΅Ρ Π½Π΅ ΡΠ°ΡΡΠ΅ΠΏΠ»Π΅Π½ΠΈΠ΅ Π³Π΅Π½ΠΎΠ², Π° ΠΈΡ ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΈΡ, ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΡ Π΄ΡΡΠ³ΠΈΠ΅ Π±Π΅Π»ΠΊΠΈ.
ΠΠ½ΡΠ΅ΡΠ΅ΡΠ½ΠΎ, ΡΡΠΎ Π΅ΡΠ»ΠΈ Π·Π°ΡΠ°Π·ΠΈΡΡ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΊΠΈ Π½Π΅ΠΈΠ·Π²Π΅ΡΡΠ½ΡΠΌ ΠΈΠΌ ΡΠ°Π³ΠΎΠΌ, ΡΠΎ Π»ΠΈΡΡ ΡΡΠΈ ΠΏΡΠΎΡΠ΅Π½ΡΠ° Π²ΡΠΆΠΈΠ²ΡΠΈΡ Π±Π°ΠΊΡΠ΅ΡΠΈΠΉ ΡΠ΄Π»ΠΈΠ½ΡΡΡ ΡΠ²ΠΎΡ CRISPR-ΠΊΠ°ΡΡΠ΅ΡΡ Π½Π° ΠΎΠ΄ΠΈΠ½ ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅Ρ, ΡΠΎΠΎΡΠ²Π΅ΡΡΡΠ²ΡΡΡΠΈΠΉ Π½ΠΎΠ²ΠΎΠΌΡ ΡΠ°Π³Ρ. ΠΡΠ»ΠΈ ΠΆΠ΅ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΊΠΈ Π·Π°ΡΠ°Π·ΠΈΡΡ ΡΠ°Π³ΠΎΠΌ, ΠΠΠ ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΎΠ³ΠΎ Ρ ΠΎΡΡ Π±Ρ ΠΎΡΡΠ°ΡΡΠΈ ΡΡ ΠΎΠ΄Π½Π° Ρ ΠΊΠ°ΠΊΠΈΠΌ-Π»ΠΈΠ±ΠΎ ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅ΡΠΎΠΌ Π² CRISPR-ΠΊΠ°ΡΡΠ΅ΡΠ΅, ΡΠΎ Π°Π΄Π°ΠΏΡΠ°ΡΠΈΡ ΠΈΠ΄Π΅Ρ Π³ΠΎΡΠ°Π·Π΄ΠΎ Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½Π΅Π΅. ΠΡ 50% Π΄ΠΎ 90% ΠΏΠΎΠΏΡΠ»ΡΡΠΈΠΈ ΠΏΠΎΠΏΠΎΠ»Π½ΡΠ΅Ρ ΡΠ²ΠΎΠΈ CRISPR ΡΡΠ°ΡΡΠΊΠ°ΠΌΠΈ Π³Π΅Π½ΠΎΠΌΠ° ΡΡΠΎΠ³ΠΎ ΡΠ°Π³Π°, ΠΈ Π²ΡΠΆΠΈΠ²Π°Π΅ΠΌΠΎΡΡΡ Π²ΠΎΠ·ΡΠ°ΡΡΠ°Π΅Ρ Π² Π΄Π΅ΡΡΡΠΊΠΈ ΡΠ°Π·. ΠΡΠΎΡ ΠΏΡΠΎΡΠ΅ΡΡ Π±ΡΠ» Π½Π°Π·Π²Π°Π½ ΠΏΡΠ°ΠΉΠΌΠΈΠ½Π³ΠΎΠΌ (Nature Communications, 2012, 3, 945, DOI:10.1038/ncomms1937; Π½Π΅ ΡΡΠΎΠ»Ρ ΡΠΆ ΡΠ°ΡΡΡΠΉ ΡΠ»ΡΡΠ°ΠΉ, ΠΊΠΎΠ³Π΄Π° Π² ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π½ΠΈΡΡ ΠΊ ΡΡΠ°ΡΡΠ΅ ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ ΡΠ²ΠΈΠ΄Π΅ΡΡ ΠΌΠΎΡΠΊΠΎΠ²ΡΠΊΠΈΠ΅ ΠΈΠ½ΡΡΠΈΡΡΡΡ ΠΈ ΡΠΎΡΡΠΈΠΉΡΠΊΠΈΠ΅ Π³ΡΠ°Π½ΡΡ: ΠΎΠ΄ΠΈΠ½ ΠΈΠ· Π²Π΅Π΄ΡΡΠΈΡ Π°Π²ΡΠΎΡΠΎΠ² ΡΡΠΎΠΉ ΠΈ ΠΏΡΠ΅Π΄ΡΠ΄ΡΡΠ΅ΠΉ ΠΏΡΠ±Π»ΠΈΠΊΠ°ΡΠΈΠΈ β Π΄ΠΎΠΊΡΠΎΡ Π±ΠΈΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΡ Π½Π°ΡΠΊ Π.Π. Π‘Π΅Π²Π΅ΡΠΈΠ½ΠΎΠ²). ΠΠΎΠ·ΠΌΠΎΠΆΠ½Π°Ρ ΠΏΡΠΈΡΠΈΠ½Π° Π² ΡΠΎΠΌ, ΡΡΠΎ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅ ΠΎΠΏΠΎΠ·Π½Π°Π½ΠΈΡ Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠΌ Cas9 ΡΡΠ°ΡΡΠΎΠ²ΠΎΠΉ ΠΏΠ»ΠΎΡΠ°Π΄ΠΊΠΈ β PAM β Ρ ΠΠΠ-ΠΌΠΈΡΠ΅Π½ΡΡ ΡΠ½Π°ΡΠ°Π»Π° ΡΠ²ΡΠ·ΡΠ²Π°Π΅ΡΡΡ Π»ΠΈΡΡ Π½Π΅Π±ΠΎΠ»ΡΡΠΎΠΉ ΡΡΠ°ΡΡΠΎΠΊ ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅ΡΠ° (6β12 Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΎΠ²), Π½Π°Π·ΡΠ²Π°Π΅ΠΌΡΠΉ Π·Π°ΡΡΠ°Π²ΠΊΠΎΠΉ, ΠΈ Π»ΠΈΡΡ Π·Π°ΡΠ΅ΠΌ ΠΎΡΡΠ°Π»ΡΠ½Π°Ρ ΡΠ°ΡΡΡ ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅ΡΠ°. ΠΡΠ»ΠΈ Π½Π° ΡΡΠ°ΡΡΠΊΠ΅ Π·Π°ΡΡΠ°Π²ΠΊΠΈ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠ½ΠΎΡΡΡ ΡΡΡΠΎΠ³ΠΎ ΡΠΎΠ±Π»ΡΠ΄Π°Π΅ΡΡΡ, ΡΠΎ Π½Π° ΠΎΡΡΠ°Π»ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΠ°ΡΡΠΈ ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅ΡΠ° Π²ΠΎΠ·ΠΌΠΎΠΆΠ½Ρ ΠΎΡΠΊΠ»ΠΎΠ½Π΅Π½ΠΈΡ, ΠΈΠ½ΠΎΠ³Π΄Π° Π΄ΠΎ 3β5 ΠΏ. Π½. ΠΠ°ΠΊΡΠ΅ΡΠΈΠΈ ΡΡΠ° Π½Π΅ΡΠΎΡΠ½ΠΎΡΡΡ Π½Π° ΠΏΠΎΠ»ΡΠ·Ρ, Π±Π»Π°Π³ΠΎΠ΄Π°ΡΡ Π΅ΠΉ ΠΎΠ½Π° ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ ΡΡΠΏΠ΅ΡΠ½ΠΎ ΠΎΠΏΠΎΠ·Π½Π°ΡΡ ΡΠ°Π³ΠΈ-ΠΌΡΡΠ°Π½ΡΡ ΠΈ Π±ΡΡΡΡΠΎ Π½Π°ΡΡΡΠΎΠΈΡΡΡΡ Π½Π° ΠΏΠΎΡΠ°ΠΆΠ΅Π½ΠΈΠ΅ Π½ΠΎΠ²ΡΡ ΡΠ΅Π»Π΅ΠΉ. Π Π²ΠΎΡ ΡΡΠ΅Π½ΡΠΌ ΠΏΡΠ΅Π΄ΡΡΠΎΠΈΡ ΡΠ°Π·ΡΠ°Π±ΠΎΡΠ°ΡΡ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄Ρ, ΠΏΠΎΠ²ΡΡΠ°ΡΡΠΈΠ΅ ΡΠΎΡΠ½ΠΎΡΡΡ ΡΠ°ΡΠΏΠΎΠ·Π½Π°Π²Π°Π½ΠΈΡ, β Π² ΡΠ°Π±ΠΎΡΠ΅ Β«Π³Π΅Π½Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΡΠΊΠ°Π»ΡΠΏΠ΅Π»ΡΒ», ΠΎ ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΎΠΌ ΠΏΠΎΠΉΠ΄Π΅Ρ ΡΠ΅ΡΡ Π΄Π°Π»ΡΡΠ΅, Π²ΡΡΠΊΡΡ ΠΏΡΠΈΠ±Π»ΠΈΠ·ΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΡ Π½Π΅ΠΎΠ±Ρ ΠΎΠ΄ΠΈΠΌΠΎ ΠΈΡΠΊΠ»ΡΡΠΈΡΡ. ΠΠΎΠ·ΠΌΠΎΠΆΠ½ΡΠΌ Π²ΡΡ ΠΎΠ΄ΠΎΠΌ ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ ΡΡΠ°ΡΡ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ crΠ ΠΠ Ρ ΡΡΠ΅ΡΠ΅Π½Π½ΠΎΠΉ ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΠ°ΡΡΡΡ (Nature Biotechnology, 2014, DOI:10.1038/nbt.2808).
ΠΠ°ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠΊ ΠΎΡΠΌΠ΅ΡΠΈΠΌ, ΡΡΠΎ Ρ Π½Π΅ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΡ ΡΠ°Π³ΠΎΠ² Π½Π°ΠΉΠ΄Π΅Π½Ρ Π³Π΅Π½Ρ, ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ±Π½ΡΠ΅ ΠΈΠ½Π³ΠΈΠ±ΠΈΡΠΎΠ²Π°ΡΡ ΡΠΈΡΡΠ΅ΠΌΡ CRISPR-Cas, ΠΈ ΠΎΠ½ΠΈ ΡΠ°ΠΊΠΆΠ΅ Π²Π΅ΡΡΠΌΠ° ΠΈΠ½ΡΠ΅ΡΠ΅ΡΠ½Ρ Π² ΠΏΠ»Π°Π½Π΅ ΠΏΡΠ°ΠΊΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠ³ΠΎ ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅Π½Π΅Π½ΠΈΡ.
ΠΠ»Ρ ΡΠ΅Π³ΠΎ ΠΈ ΠΊΠ°ΠΊ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΡΡ ΡΠ΅Ρ Π½ΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΠΈ CRISPR-Cas9
ΠΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ Π°Π΄Π°ΠΏΡΠΈΡΡΡΡΠ΅ΠΉΡΡ ΠΈΠΌΠΌΡΠ½Π½ΠΎΠΉ ΡΠΈΡΡΠ΅ΠΌΡ Π±Π°ΠΊΡΠ΅ΡΠΈΠΉ Π½Π°ΡΠ°Π»ΠΎΡΡ Π΅ΡΠ΅ Π² 2007 Π³ΠΎΠ΄Ρ, ΠΊΠΎΠ³Π΄Π° ΡΠΈΡΠΌΠ° Β«ΠΡΠΏΠΎΠ½Β» ΡΠΎΠ·Π΄Π°Π»Π° ΡΡΡΠΎΠΉΡΠΈΠ²ΡΠ΅ ΠΊ Π²ΠΈΡΡΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΈΠ½ΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠΈ Π±Π°ΠΊΡΠ΅ΡΠΈΠ°Π»ΡΠ½ΡΠ΅ ΡΡΠ°ΠΌΠΌΡ Π΄Π»Ρ ΠΏΡΠΎΠΈΠ·Π²ΠΎΠ΄ΡΡΠ²Π° ΠΏΡΠΎΠ΄ΡΠΊΡΠΎΠ² ΠΏΠΈΡΠ°Π½ΠΈΡ (Π² ΡΡΠΈΡ ΠΎΠΏΡΡΠ°Ρ Π±Π°ΠΊΡΠ΅ΡΠΈΠΉ Π²Π°ΠΊΡΠΈΠ½ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π»ΠΈ ΡΠ°Π·ΡΡΡΠ΅Π½Π½ΡΠΌΠΈ Π²ΠΈΡΡΡΠ°ΠΌΠΈ). ΠΠ΄Π½Π°ΠΊΠΎ ΠΏΠΎΠ΄Π»ΠΈΠ½Π½ΡΠΉ Π±ΡΠΌ Π½Π°ΡΠ°Π»ΡΡ Π² ΠΊΠΎΠ½ΡΠ΅ 2012 Π³ΠΎΠ΄Π°, ΠΏΠΎΡΠ»Π΅ ΡΠΎΠ³ΠΎ, ΠΊΠ°ΠΊ ΠΠ°ΡΡΠΈΠ½ ΠΠΆΠΈΠ½Π΅ΠΊ ΡΡΠΌΠ΅Π» ΠΎΠ±ΡΠ΅Π΄ΠΈΠ½ΠΈΡΡ tracrΠ ΠΠ ΠΈ crΠ ΠΠ Π² ΠΎΠ΄Π½Ρ ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΡΡ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»Ρ Π ΠΠ β ΡΠ΅ΠΏΠ΅ΡΡ Π΅Π΅ Π½Π°Π·ΡΠ²Π°ΡΡ Π ΠΠ Π³ΠΈΠ΄ΠΎΠΌ, ΠΈΠ»ΠΈ sgΠ ΠΠ, ΠΎΡ Π°Π½Π³Π». single-guide RNA β ΠΈ ΠΈΠ·ΠΎΠ±ΡΠ΅Π» Π²Π΅ΠΊΡΠΎΡ Π΄Π»Ρ ΠΊΠ»ΠΎΠ½ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ ΡΡΠΎΠΉ Π ΠΠ (M. Jinek, K. Chylinski, I. Fonfara et al. Science, 2012, 337, 816β821, DOI:10.1126/science.1225829).
ΠΠΊΠ°Π·Π°Π»ΠΎΡΡ, ΡΡΠΎ ΡΠ°ΠΊΠ°Ρ ΡΠΈΠ½ΡΠ΅ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠ°Ρ sgΠ ΠΠ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΡΠ΅Ρ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΊΡ Ρ Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠΌ Cas9 Π½ΠΈΡΡΡΡ Π½Π΅ Ρ ΡΠΆΠ΅, ΡΠ΅ΠΌ tracrΠ ΠΠ ΠΈ crΠ ΠΠ, Π° Π·Π°ΡΠ΅ΠΌ Π½Π°Ρ ΠΎΠ΄ΠΈΡ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠ½ΡΠ΅ ΠΠΠ ΠΈ ΠΏΡΠ°Π²ΠΈΠ»ΡΠ½ΠΎ ΠΎΡΠΈΠ΅Π½ΡΠΈΡΡΠ΅Ρ Cas9, ΡΡΠΎΠ±Ρ ΡΠΎΠ·Π΄Π°Π²Π°ΡΡ Π² Π½ΠΈΡ Π΄Π²ΡΡ ΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΡΠ΅ ΡΠ°Π·ΡΡΠ²Ρ (ΡΠΈΡ. 4). ΠΡΠΈΡΠ΅ΠΌ ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ ΡΠ΄Π΅Π»Π°ΡΡ ΡΡΠΎ ΠΈΠΌΠ΅Π½Π½ΠΎ Π² ΡΠΎΠΌ ΡΡΠ°ΡΡΠΊΠ΅, Π² ΠΊΠ°ΠΊΠΎΠΌ ΠΏΠΎΠΆΠ΅Π»Π°Π΅Ρ ΠΈΡΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»Ρ, β Π΄ΠΎΡΡΠ°ΡΠΎΡΠ½ΠΎ Π²ΠΊΠ»ΡΡΠΈΡΡ Π² sgΠ ΠΠ ΡΡΠ°Π³ΠΌΠ΅Π½Ρ, ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠ½ΡΠΉ ΡΡΠΎΠΌΡ ΡΡΠ°ΡΡΠΊΡ. ΠΠΎΠ½Π΅ΡΠ½ΠΎ, Π²ΡΠ±ΡΠ°ΡΡ Π½Π°Π΄ΠΎ ΡΠ°ΠΊΡΡ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΡ, ΠΊΠΎΡΠΎΡΠ°Ρ Π²ΡΡΡΠ΅ΡΠ°Π΅ΡΡΡ ΡΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ Π² Π½ΡΠΆΠ½ΠΎΠΌ Π²Π°ΠΌ ΠΌΠ΅ΡΡΠ΅ ΠΈ Π½Π΅ ΠΏΠΎΠ²ΡΠΎΡΡΠ΅ΡΡΡ ΡΠ°ΠΌ, Π³Π΄Π΅ ΡΠ°Π·ΡΠ΅Π·Ρ Π½Π΅ Π½ΡΠΆΠ½Ρ. ΠΠ½Π°ΡΠ΅ ΡΠΊΡΠΏΠ΅ΡΠΈΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠΎΡ ΠΎΠΊΠ°ΠΆΠ΅ΡΡΡ Π² ΠΏΠΎΠ»ΠΎΠΆΠ΅Π½ΠΈΠΈ Π½Π΅ΡΠΌΠ΅Π»ΠΎΠ³ΠΎ ΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»Ρ, ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠΉ ΡΠΊΠΎΠΌΠ°Π½Π΄ΠΎΠ²Π°Π» ΡΠ΅ΠΊΡΡΠΎΠ²ΠΎΠΌΡ ΡΠ΅Π΄Π°ΠΊΡΠΎΡΡ Π½Π°ΠΉΡΠΈ ΠΈ ΡΠ΄Π°Π»ΠΈΡΡ ΠΈΠ· ΡΠ°ΡΡΠΊΠ°Π·Π° ΠΈΠΌΡ Β«ΠΠ»ΡΒ» ΠΈ Ρ ΡΠ΄ΠΈΠ²Π»Π΅Π½ΠΈΠ΅ΠΌ ΡΠ²ΠΈΠ΄Π΅Π», ΡΡΠΎ ΠΏΠΎΡΡΡΠ°Π΄Π°Π»ΠΈ ΡΠ°ΠΊΠΆΠ΅ Β«ΠΠΎΠ»ΡΒ», Β«ΠΏΠΎΠ»ΡΒ» ΠΈ Β«ΡΠΎΠΏΠΎΠ»ΡΒ». ΠΠΎΡΠ»Π΅ ΡΠΎΠ³ΠΎ, ΠΊΠ°ΠΊ ΡΠ°Π·ΡΠ΅Π· Π² Π½ΡΠΆΠ½ΠΎΠΌ ΠΌΠ΅ΡΡΠ΅ ΡΠ΄Π΅Π»Π°Π½, ΠΊΠ»Π΅ΡΠΊΠ° ΡΠ°ΠΌΠ° ΡΡΡΠ΅ΠΌΠΈΡΡΡ Π΅Π³ΠΎ Π»ΠΈΠΊΠ²ΠΈΠ΄ΠΈΡΠΎΠ²Π°ΡΡ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ ΠΏΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ°, Π½Π°Π·ΡΠ²Π°Π΅ΠΌΠΎΠ³ΠΎ ΡΠ΅ΠΏΠ°ΡΠ°ΡΠΈΠ΅ΠΉ.
ΠΠ°ΠΊ Π²Π½Π΅Π΄ΡΠΈΡΡ Π² ΠΊΠ»Π΅ΡΠΊΡ Π²ΡΡΠΎΠΊΠΎΡΠΎΡΠ½ΡΠΉ Π³Π΅Π½Π½ΡΠΉ ΡΠΊΠ°Π»ΡΠΏΠ΅Π»Ρ, ΡΠΎΡΡΠΎΡΡΠΈΠΉ ΠΈΠ· sgΠ ΠΠ ΠΈ Cas9? ΠΠ»Ρ ΡΡΠΎΠ³ΠΎ ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°ΡΡ ΡΠ°ΠΊ Π½Π°Π·ΡΠ²Π°Π΅ΠΌΡΠΉ all-in-one CRISPR-Cas9 cloning vector β ΠΊΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π²ΡΡ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»Ρ ΠΠΠ, ΠΊΠΎΡΠΎΡΠ°Ρ ΠΊΠΎΠ΄ΠΈΡΡΠ΅Ρ sgΠ ΠΠ ΠΈ ΠΌΠ°ΡΡΠΈΡΠ½ΡΡ Π ΠΠ Π±Π΅Π»ΠΊΠ° Cas9. Π’Π°ΠΊΠΈΠ΅ Π²Π΅ΠΊΡΠΎΡΡ, Ρ Π²ΠΎΠ·ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎΡΡΡΡ Π²ΡΡΠ°Π²ΠΈΡΡ Π² Π½ΡΠΆΠ½ΠΎΠ΅ ΠΌΠ΅ΡΡΠΎ ΡΡΠ°ΡΡΠΎΠΊ, ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΌΠ΅Π½ΡΠ°ΡΠ½ΡΠΉ Π²Π°ΡΠ΅ΠΉ ΠΌΠΈΡΠ΅Π½ΠΈ, ΡΠΆΠ΅ ΠΏΡΠ΅Π΄Π»Π°Π³Π°ΡΡ Π±ΠΈΠΎΡΠ΅Ρ Π½ΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠ΅ ΡΠΈΡΠΌΡ. ΠΡΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΠΎ, ΠΊΡΠΎΠΌΠ΅ ΠΊΠΎΠ΄ΠΈΡΡΡΡΠΈΡ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠ΅ΠΉ, ΡΠ°ΠΌ Π±ΡΠ΄ΡΡ ΠΈ ΡΠΏΡΠ°Π²Π»ΡΡΡΠΈΠ΅, ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠ΅ ΠΏΠΎΠ΄ΡΠΊΠ°ΠΆΡΡ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΊΠ΅, ΠΎΡΠΊΡΠ΄Π° Π½Π°Π΄ΠΎ ΡΡΠΈΡΡΠ²Π°ΡΡ Π ΠΠ.
ΠΡΠΏΠΈΠ² ΡΠ°ΠΊΠΎΠΉ Π²Π΅ΠΊΡΠΎΡ ΠΈ Π²ΡΡΠ°Π²ΠΈΠ² Π² Π½Π΅Π³ΠΎ Β«ΡΠ²ΠΎΡΒ» ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΡ, ΠΈΡΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»Ρ Π½Π°ΡΠ°Π±Π°ΡΡΠ²Π°Π΅Ρ Π΅Π³ΠΎ Π² Π½Π΅ΠΎΠ±Ρ ΠΎΠ΄ΠΈΠΌΠΎΠΌ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ΠΎΠΌ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»ΡΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΊΠ»ΠΎΠ½ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ. ΠΠ΅ΠΊΡΠΎΡ Π²Π½Π΅Π΄ΡΡΡΡ Π² ΠΊΠ»Π΅ΡΠΊΠΈ ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΠ°Π»ΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ Π»Π°Π±ΠΎΡΠ°ΡΠΎΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΡΡΠ°ΠΌΠΌΠ° ΠΊΠΈΡΠ΅ΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΏΠ°Π»ΠΎΡΠΊΠΈ, Π·Π°ΡΠ΅ΠΌ ΡΠ°ΡΡΡΡ Π±Π°ΠΊΡΠ΅ΡΠΈΠΉ Π½Π° ΠΏΠΈΡΠ°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΡΠ΅Π΄Π΅, ΠΏΡΠΈΡΠ΅ΠΌ ΠΎΠ½ΠΈ ΠΌΠ½ΠΎΠ³ΠΎΠΊΡΠ°ΡΠ½ΠΎ ΠΊΠΎΠΏΠΈΡΡΡΡ Π²Π΅ΠΊΡΠΎΡ (ΡΡΠΎ ΠΈ Π½Π°Π·ΡΠ²Π°ΡΡ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»ΡΡΠ½ΡΠΌ ΠΊΠ»ΠΎΠ½ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ΠΌ). ΠΠΎΠΏΠΈΡΡΡΡ, Π½ΠΎ Β«Π½Π΅ ΡΠΈΡΠ°ΡΡΒ», sgΠ ΠΠ ΠΈ Cas9 Π² Π±Π°ΠΊΡΠ΅ΡΠΈΠ°Π»ΡΠ½ΡΡ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΊΠ°Ρ Π½Π΅ ΡΠΈΠ½ΡΠ΅Π·ΠΈΡΡΡΡΡΡ β ΠΊΠΎΠΌΠ°Π½Π΄Π½ΡΠ΅ ΡΠΈΠ³Π½Π°Π»Ρ Π² Π²Π΅ΠΊΡΠΎΡΠ΅ Π°Π΄ΡΠ΅ΡΠΎΠ²Π°Π½Ρ Π΄ΡΡΠ³ΠΎΠΌΡ ΠΎΡΠ³Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΡ. ΠΠΎΡΠΎΠΌ Π²Π΅ΠΊΡΠΎΡ Π²ΡΠ΄Π΅Π»ΡΡΡ ΠΈΠ· Π±Π°ΠΊΡΠ΅ΡΠΈΠΉ ΠΈ ΡΡΠ°Π½ΡΡΠΎΡΠΌΠΈΡΡΡΡ ΠΈΠΌ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΊΠΈ, Π³Π΅Π½ΠΎΠΌ ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΡ ΠΌΡ Ρ ΠΎΡΠΈΠΌ ΠΎΡΡΠ΅Π΄Π°ΠΊΡΠΈΡΠΎΠ²Π°ΡΡ. ΠΠΎΡ Π² Π½ΠΈΡ -ΡΠΎ ΠΈ Π½Π°ΡΠ½ΡΡ ΡΠΈΠ½ΡΠ΅Π·ΠΈΡΠΎΠ²Π°ΡΡΡΡ Π ΠΠ-Π³ΠΈΠ΄ ΠΈ Cas9.
ΠΡΠΎ ΠΈΠ·ΠΎΠ±ΡΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ Π³Π΅Π½Π½ΡΡ ΠΈΠ½ΠΆΠ΅Π½Π΅ΡΠΎΠ² Π΅ΡΠ΅ Π² Π½Π°ΡΠ°Π»Π΅ 2013 Π³ΠΎΠ΄Π° Π΄ΠΎΠΊΠ°Π·Π°Π»ΠΎ ΡΠ²ΠΎΡ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡ Π½Π° ΡΠ΅Π»ΠΎΠ²Π΅ΡΠ΅ΡΠΊΠΈΡ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΊΠ°Ρ Π² ΠΊΡΠ»ΡΡΡΡΠ΅. ΠΠΎΡΠ»Π΅ ΠΈΠ½ΡΠΈΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΊΠΈ CRISPR-Cas9-Π²Π΅ΠΊΡΠΎΡΠΎΠΌ Π² Π½Π΅ΠΉ Π΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎ ΠΏΠΎΡΠ²ΠΈΠ»ΡΡ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΊΡ Cas9-sgΠ ΠΠ, ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠΉ Π·Π°ΡΠ΅ΠΌ ΠΏΡΠΎΠ½ΠΈΠΊΠ°Π» Π² ΡΠ΄ΡΠΎ ΠΈ Π½Π°Ρ ΠΎΠ΄ΠΈΠ» ΡΠΎΠΎΡΠ²Π΅ΡΡΡΠ²ΡΡΡΠΈΠ΅ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ ΠΠΠ (eLife; 2:e00471, DOI:10.7554/eLife.00471, Nature Biotechnology, 2013, 31, 230β232).
Π ΡΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ 2013 Π³ΠΎΠ΄Π° ΡΠ΅Ρ Π½ΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΠΈ CRISPR Π±ΡΠ»ΠΈ ΠΎΠΏΡΠΎΠ±ΠΎΠ²Π°Π½Ρ ΠΏΠΎΡΡΠΈ Π½Π° Π²ΡΠ΅Ρ ΠΌΠΎΠ΄Π΅Π»ΡΠ½ΡΡ Π²ΠΈΠ΄Π°Ρ , ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΠ΅ΠΌΡΡ Π² ΡΠΊΡΠΏΠ΅ΡΠΈΠΌΠ΅Π½ΡΠ°Ρ . ΠΠ° Π±Π°ΠΊΡΠ΅ΡΠΈΡΡ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΊΡΡ Cas9-sgΠ ΠΠ ΠΏΡΠΎΡΠ²ΠΈΠ»ΠΈ ΡΠ΅Π±Ρ ΠΊΠ°ΠΊ Π²ΡΡΠΎΠΊΠΎΠΈΠ·Π±ΠΈΡΠ°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΡΠΉ Β«ΡΠΌΠ½ΡΠΉ Π°Π½ΡΠΈΠ±ΠΈΠΎΡΠΈΠΊΒ» β Ρ ΠΈΡ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ ΠΈΠ· ΡΠΌΠ΅ΡΠ°Π½Π½ΠΎΠΉ ΠΊΡΠ»ΡΡΡΡΡ Π±Π°ΠΊΡΠ΅ΡΠΈΠΉ ΡΠ΄Π°Π»ΡΠ»ΠΈ ΠΎΡΠ΄Π΅Π»ΡΠ½ΡΠ΅ Π²ΠΈΠ΄Ρ ΠΈ ΡΡΠ°ΠΌΠΌΡ; Β«ΡΠΊΠ°Π»ΡΠΏΠ΅Π»ΡΒ» ΡΠ°ΡΡΠ΅ΠΊΠ°Π» ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ½ΡΠ΅ Π΄Π»Ρ Π½ΠΈΡ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ, Π½Π΅ ΡΡΠΎΠ³Π°Ρ ΠΎΡΡΠ°Π»ΡΠ½ΡΡ . ΠΠ½ΠΈ ΠΏΠΎΠΊΠ°Π·Π°Π»ΠΈ ΡΠ΅Π±Ρ ΠΏΡΠΎΡΡΡΠΌ ΠΈ ΠΌΠΎΡΠ½ΡΠΌ ΠΈΠ½ΡΡΡΡΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠΌ Π³Π΅Π½Π½ΠΎΠΉ ΠΈΠ½ΠΆΠ΅Π½Π΅ΡΠΈΠΈ Π² ΠΎΠΏΡΡΠ°Ρ Ρ Π΄ΡΠΎΠΆΠΆΠ°ΠΌΠΈ, ΠΏΠ»ΠΎΠ΄ΠΎΠ²ΡΠΌΠΈ ΠΌΡΡΠΊΠ°ΠΌΠΈ, ΡΡΠ±ΠΊΠ°ΠΌΠΈ Π΄Π°Π½ΠΈΠΎ. ΠΠΎΡΠ²ΠΈΠ»ΠΈΡΡ Π½Π° ΡΠ²Π΅Ρ ΠΌΡΡΠΈ, ΠΎΠ±Π΅Π·ΡΡΠ½Ρ, ΡΠ²ΠΈΠ½ΡΠΈ Ρ ΠΏΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎ Π²ΡΠΏΠΎΠ»Π½Π΅Π½Π½ΡΠΌΠΈ ΠΌΡΡΠ°ΡΠΈΡΠΌΠΈ. ΠΠ½ΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠΈ ΠΌΠ°ΡΡΠΈΡΠ½ΠΎΠΉ Π ΠΠ Cas9 ΠΈ sgΠ ΠΠ Π² ΠΊΠ»Π΅ΡΠΊΠΈ Π·Π°ΡΠΎΠ΄ΡΡΠ° ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΡΡΡ Π±ΡΡΡΡΠΎ, Π²ΡΠ΅Π³ΠΎ Π·Π° ΠΎΠ΄Π½Ρ ΡΡΠ°Π΄ΠΈΡ, ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠΈΡΡ ΡΠ²ΠΈΠ½Π΅ΠΉ Ρ ΠΌΠΎΠ΄ΠΈΡΠΈΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΠΌ Π³Π΅Π½ΠΎΠΌΠΎΠΌ ΠΈ ΡΠ°ΠΊΠΈΠΌ ΠΎΠ±ΡΠ°Π·ΠΎΠΌ ΡΠΎΠ·Π΄Π°Π²Π°ΡΡ ΠΌΠΎΠ΄Π΅Π»ΠΈ Π΄Π»Ρ ΠΈΠ·ΡΡΠ΅Π½ΠΈΡ Π³Π΅Π½Π΅ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΡ Π·Π°Π±ΠΎΠ»Π΅Π²Π°Π½ΠΈΠΉ ΡΠ΅Π»ΠΎΠ²Π΅ΠΊΠ° ΠΈ ΠΆΠΈΠ²ΠΎΡΠ½ΡΡ ΠΈ ΡΠ΅ΡΡΠΈΡΠΎΠ²Π°ΡΡ Π½Π° Π½ΠΈΡ Π½ΠΎΠ²ΡΠ΅ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ΠΈΠΊΠΈ Π»Π΅ΡΠ΅Π½ΠΈΡ. ΠΡΠΎΡ ΠΆΠ΅ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅Π½ΡΡΡ ΠΈ Π΄Π»Ρ ΡΠ»ΡΡΡΠ΅Π½ΠΈΡ ΠΏΠΎΡΠΎΠ΄ ΡΠ΅Π»ΡΡΠΊΠΎΡ ΠΎΠ·ΡΠΉΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΡΡ ΠΆΠΈΠ²ΠΎΡΠ½ΡΡ ΠΈ ΡΠΎΡΡΠΎΠ² ΡΠ°ΡΡΠ΅Π½ΠΈΠΉ.
ΠΡΠΎΠ³ΡΠ°ΠΌΠΌΠΈΡΡΠ΅ΠΌΡΠ΅ Π ΠΠ-Π³ΠΈΠ΄ΠΎΠΌ Π½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Ρ Π±ΡΠ»ΠΈ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½Ρ Π΄Π»Ρ ΡΠ΅Π»Π΅Π½Π°ΠΏΡΠ°Π²Π»Π΅Π½Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΡΠ΅Π΄Π°ΠΊΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ Π³Π΅Π½ΠΎΠΌΠ° Π² ΠΊΠ»Π΅ΡΠΊΠ°Ρ ΡΠ΅Π»ΠΎΠ²Π΅ΠΊΠ° (Nature Biotechnology, 2013, 31, 230β232). ΠΠΎΠ½ΡΡΠ½ΠΎ, ΡΡΠΎ ΡΠ°ΠΊΠ°Ρ Π²ΠΎΠ·ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎΡΡΡ Π²Π½ΡΡΠ°Π΅Ρ ΠΎΠΏΠ°ΡΠ΅Π½ΠΈΡ. ΠΠΎ Π΅ΡΠ»ΠΈ Π³ΠΎΠ²ΠΎΡΠΈΡΡ ΠΎ ΡΠ΅Π°Π»ΡΠ½ΡΡ , Π° Π½Π΅ ΡΠ°Π½ΡΠ°ΡΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΡ ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅Π½Π΅Π½ΠΈΡΡ , ΠΏΠΎΠ΄ΠΎΠ±Π½ΠΎΠ΅ ΡΠ΅Π΄Π°ΠΊΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ β ΠΏΡΠ΅ΠΆΠ΄Π΅ Π²ΡΠ΅Π³ΠΎ ΠΌΠΎΡΠ½ΡΠΉ ΠΈΠ½ΡΡΡΡΠΌΠ΅Π½Ρ ΠΈΡΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ. ΠΠ°ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅Ρ, Π²ΡΠΊΠ»ΡΡΠ°Ρ Ρ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ CRISPR-Cas9 ΠΎΡΠ΄Π΅Π»ΡΠ½ΡΠ΅ Π³Π΅Π½Ρ, ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ ΠΈΠ΄Π΅Π½ΡΠΈΡΠΈΡΠΈΡΠΎΠ²Π°ΡΡ ΡΠ΅, ΡΡΠΎ ΠΎΡΠ²Π΅ΡΠ°ΡΡ Π·Π° Π²ΡΠΆΠΈΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΎΠΊ ΠΏΡΠΈ ΡΠ°ΠΊΠ΅ (Science, 2014, 343, 6166, 84β87). ΠΠΎΠ»Π΅Π΅ ΡΠΎΠ³ΠΎ: ΠΎΠ±Π½Π°ΡΡΠΆΠΈΠ² Π² ΠΎΡΠ΄Π΅Π»ΡΠ½ΡΡ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΊΠ°Ρ ΠΎΡΠ³Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΠ° ΠΌΡΡΠ°ΡΠΈΠΈ, ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠ΅ Π²Π΅Π΄ΡΡ ΠΊ ΡΠ°Π·Π²ΠΈΡΠΈΡ ΡΠ°ΠΊΠ°, ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ Π±ΡΠ΄Π΅Ρ, ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΡ Π°Π½Π°Π»ΠΎΠ³ΠΈΡΠ½ΡΠ΅ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄Ρ, ΡΠ±ΡΠ°ΡΡ ΠΈΡ (Genome Medicine, 2014, 6, 5). ΠΠ° ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΊΠΈΠ΅ ΡΡΠΎΠΊΠΈ Π±ΡΠ»Π° ΡΠΈΠ½ΡΠ΅Π·ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π° ΠΎΠ³ΡΠΎΠΌΠ½Π°Ρ Π±ΠΈΠ±Π»ΠΈΠΎΡΠ΅ΠΊΠ° Π ΠΠ-Π³ΠΈΠ΄ΠΎΠ² Ρ ΡΠ°Π·Π»ΠΈΡΠ½ΡΠΌΠΈ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΡΠΌΠΈ β 73 000 ΡΠ°Π·Π»ΠΈΡΠ½ΡΡ sgΠ ΠΠ (Science, 2014, 343, 6166, 80β84). Π‘ Π΅Π΅ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ Π½Π°ΠΏΡΠ°Π²Π»ΡΡΡ Cas9 Π½Π° 80β90% Π²ΡΠ΅Ρ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠ΅ΠΉ Π³Π΅Π½ΠΎΠΌΠ° ΡΠ΅Π»ΠΎΠ²Π΅ΠΊΠ°.
Π Π΅Π·ΠΎΠ½Π½ΡΠΉ Π²ΠΎΠΏΡΠΎΡ: Π½Π΅ΡΠΆΠ΅Π»ΠΈ Π΄ΠΎ 2013 Π³ΠΎΠ΄Π° Ρ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»ΡΡΠ½ΡΡ Π³Π΅Π½Π΅ΡΠΈΠΊΠΎΠ² Π½Π΅ Π±ΡΠ»ΠΎ ΠΈΠ½ΡΡΡΡΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠ² Π΄Π»Ρ ΡΠ°Π·ΡΠ΅Π·Π°Π½ΠΈΡ ΠΠΠ Π² Π½ΡΠΆΠ½ΠΎΠΉ ΡΠΎΡΠΊΠ΅? ΠΡΠ»ΠΈ, Π½ΠΎ Π·Π½Π°ΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎ ΠΌΠ΅Π½Π΅Π΅ ΡΠ΄ΠΎΠ±Π½ΡΠ΅. ΠΠ°ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅Ρ, ΠΈΡΠΊΡΡΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΡΠ΅ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΡ, ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ°Π΅ΠΌΡΠ΅ ΠΏΡΡΠ΅ΠΌ ΡΠ»ΠΈΡΠ½ΠΈΡ ΠΠΠ-ΡΠ°Π·ΡΠ΅Π·Π°ΡΡΠ΅Π³ΠΎ Π΄ΠΎΠΌΠ΅Π½Π° Π½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Ρ Ρ ΠΠΠ-ΡΠ²ΡΠ·ΡΠ²Π°ΡΡΠΈΠΌ Π΄ΠΎΠΌΠ΅Π½ΠΎΠΌ Π΄ΡΡΠ³ΠΎΠ³ΠΎ Π±Π΅Π»ΠΊΠ°. ΠΠ»Ρ ΠΊΠ°ΠΆΠ΄ΠΎΠΉ ΠΠΠ-ΠΌΠΈΡΠ΅Π½ΠΈ ΠΏΡΠΈΡ ΠΎΠ΄ΠΈΠ»ΠΎΡΡ ΠΊΡΠΎΠΏΠΎΡΠ»ΠΈΠ²ΠΎ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΡΡΠΈΡΠΎΠ²Π°ΡΡ Π½ΠΎΠ²ΡΠΉ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½Ρ. ΠΠΎ ΡΡΠ°Π²Π½Π΅Π½ΠΈΡ Ρ ΡΡΠΈΠΌΠΈ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΡΡΠΊΡΠΈΡΠΌΠΈ ΡΠΈΡΡΠ΅ΠΌΠ° CRISPR, Π³Π΄Π΅ Π² ΠΊΠ°ΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅ Π½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Ρ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΠ΅ΡΡΡ ΠΎΠ΄ΠΈΠ½ ΠΈ ΡΠΎΡ ΠΆΠ΅ Cas9, Π° ΠΌΠ΅Π½ΡΡΡ ΠΏΡΠΈΡ ΠΎΠ΄ΠΈΡΡΡ Π»ΠΈΡΡ sgΠ ΠΠ, ΠΎΠΊΠ°Π·Π°Π»Π°ΡΡ Π½Π°ΠΌΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΏΡΠΎΡΠ΅ ΠΈ Π΄Π΅ΡΠ΅Π²Π»Π΅. Π’ΠΎ, Π½Π° ΡΡΠΎ ΡΡ ΠΎΠ΄ΠΈΠ»ΠΈ ΠΌΠ΅ΡΡΡΡ ΠΈ Π³ΠΎΠ΄Ρ ΡΡΡΠ΄Π°, ΡΠ΄Π°Π΅ΡΡΡ ΡΠ΄Π΅Π»Π°ΡΡ Π·Π° Π½Π΅Π΄Π΅Π»Ρ.
ΠΠ°ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠΊ, Π΄Π»Ρ ΡΠ΅Ρ , ΠΊΡΠΎ Π΅ΡΠ΅ Π½Π΅ ΡΡΡΠ°Π», β Π½Π΅ΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ ΡΠ»ΠΎΠ² ΠΎ Π΄ΡΡΠ³ΠΈΡ ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅Π½Π΅Π½ΠΈΡΡ CRISPR-Cas9 (ΡΠΈΡ. 5). ΠΠ°ΡΡΠ΄Ρ Ρ ΠΎΠ±ΡΡΠ½ΡΠΌ Β«ΠΏΡΠΈΡΠΎΠ΄Π½ΡΠΌΒ» Cas9, ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠΉ Π΄Π΅Π»Π°Π΅Ρ Π΄Π²ΡΡ ΡΠ΅ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠ½ΡΠ΅ ΡΠ°Π·ΡΡΠ²Ρ Π² ΠΠΠ, ΡΡΠ΅Π½ΡΠ΅ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΡΡ Π΅Π³ΠΎ ΠΈΠ·ΠΌΠ΅Π½Π΅Π½Π½ΡΠ΅ ΡΠΎΡΠΌΡ. ΠΠ΅ΡΠ²ΠΎΠΉ ΡΡΠΎΠΈΡ ΡΠΏΠΎΠΌΡΠ½ΡΡΡ Cas9-Π½ΠΈΠΊΠ°Π·Ρ β Π±Π΅Π»ΠΎΠΊ, Ρ ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΎΠ³ΠΎ Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½Π° ΡΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ ΠΎΠ΄Π½Π° ΠΈΠ· Π΅Π³ΠΎ Π½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·, Π° Π΄ΡΡΠ³Π°Ρ ΠΈΠ½Π°ΠΊΡΠΈΠ²ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π°. Π’Π°ΠΊΠΎΠΉ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½Ρ Π΄Π΅Π»Π°Π΅Ρ ΡΠ°Π·ΡΡΠ² ΡΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ Π² ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠΉ ΠΈΠ· Π΄Π²ΡΡ ΡΠ΅ΠΏΠ΅ΠΉ ΠΠΠ. ΠΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΡ ΠΏΠ°ΡΠΎΡΠΊΡ ΡΠ°ΠΊΠΈΡ Π½ΠΈΠΊΠ°Π· Ρ ΡΠ°Π·Π½ΡΠΌΠΈ sgΠ ΠΠ, ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ Π·Π½Π°ΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎ ΠΏΠΎΠ²ΡΡΠΈΡΡ ΡΠΎΡΠ½ΠΎΡΡΡ Π³Π΅Π½Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΡΠΊΠ°Π»ΡΠΏΠ΅Π»Ρ, Π° ΠΊΡΠΎΠΌΠ΅ ΡΠΎΠ³ΠΎ, Π²ΡΡΠ΅Π·Π°ΡΡ Π±ΠΎΠ»ΡΡΠΈΠ΅ ΡΡΠ°ΡΡΠΊΠΈ ΠΠΠ (Cell, 2013, 154, 1380β1389).
Π£ ΠΌΡΡΠ°Π½ΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ Π±Π΅Π»ΠΊΠ° dCas9 ΠΈΠ½Π°ΠΊΡΠΈΠ²ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Ρ ΠΎΠ±Π΅ Π½ΡΠΊΠ»Π΅Π°Π·Ρ. ΠΠ½ Π½Π°Ρ ΠΎΠ΄ΠΈΡ ΠΠΠ-ΠΌΠΈΡΠ΅Π½Ρ ΠΈ ΡΠ²ΡΠ·ΡΠ²Π°Π΅ΡΡΡ Ρ Π½Π΅ΠΉ, Π½ΠΎ Π½Π΅ ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ±Π΅Π½ Π΅Π΅ ΡΠ°Π·ΡΠ΅Π·Π°ΡΡ. ΠΠ°Π·Π°Π»ΠΎΡΡ Π±Ρ, ΠΊΠ°ΠΊΠ°Ρ ΠΏΠΎΠ»ΡΠ·Π° ΠΎΡ ΡΡΠΏΡΡ Π½ΠΎΠΆΠ½ΠΈΡ? ΠΠ΄Π½Π°ΠΊΠΎ ΠΈΠ· Π½ΠΈΡ ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ ΡΠ΄Π΅Π»Π°ΡΡ Ρ ΠΎΡΠΎΡΠΈΠΉ Π·Π°ΠΆΠΈΠΌ ΠΈΠ»ΠΈ ΠΏΡΠΈΡΠ΅ΠΏΠΊΡ. ΠΠ΅Π»ΠΎΠΊ dCas9 ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅Π½ΡΡΡ Π΄Π»Ρ ΠΈΠ½Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π°ΡΠΈΠΈ Π³Π΅Π½ΠΎΠ² Π½Π° ΡΡΠ°Π΄ΠΈΠΈ ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΈΠΈ β ΠΎΠ½ Π±Π»ΠΎΠΊΠΈΡΡΠ΅Ρ ΠΏΡΠΎΠ΄Π²ΠΈΠΆΠ΅Π½ΠΈΠ΅ Π ΠΠ-ΠΏΠΎΠ»ΠΈΠΌΠ΅ΡΠ°Π·Ρ, ΡΠΎΠ³ΠΎ ΡΠ°ΠΌΠΎΠ³ΠΎ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΠ°, ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠΉ ΡΠΈΠ½ΡΠ΅Π·ΠΈΡΡΠ΅Ρ Π ΠΠ Π½Π° ΠΌΠ°ΡΡΠΈΡΠ΅ ΠΠΠ. ΠΡΠΎΡ ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ± Π½Π°Π·ΡΠ²Π°Π΅ΡΡΡ CRISPR- ΠΈΠ½ΡΠ΅ΡΡΠ΅ΡΠ΅Π½ΡΠΈΠ΅ΠΉ, ΠΈΠ»ΠΈ CRISPRi (Cell, 2013, 152, 1173β1183). ΠΠ½Π°Π»ΠΎΠ³ΠΈΡΠ½ΡΠΌ ΡΠΏΠΎΡΠΎΠ±ΠΎΠΌ ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ Π½Π΅ ΠΏΠΎΠ»Π½ΠΎΡΡΡΡ Π²ΡΠΊΠ»ΡΡΠ°ΡΡ ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΈΡ, Π° ΠΈΠ·Π±ΠΈΡΠ°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎ ΠΌΠ΅Π½ΡΡΡ Π΅Π΅ Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡ. ΠΠ»Ρ ΡΡΠΎΠ³ΠΎ ΠΊ dCas9 Π΄ΠΎΠ±Π°Π²Π»ΡΡΡ Π΄ΠΎΠΌΠ΅Π½ Π±Π΅Π»ΠΊΠ° β ΡΠ°ΠΊΡΠΎΡΠ° ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΈΠΈ, ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠΉ ΡΠ²Π΅Π»ΠΈΡΠΈΠ²Π°Π΅Ρ ΠΈΠ»ΠΈ ΠΏΠΎΠ΄Π°Π²Π»ΡΠ΅Ρ Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡ Π³Π΅Π½ΠΎΠ², Π° Π·Π°ΡΠ΅ΠΌ ΡΠ½Π°Π±ΠΆΠ°ΡΡ Π΅Π³ΠΎ sgΠ ΠΠ, ΠΊΠΎΡΠΎΡΠ°Ρ Π΄ΠΎΡΡΠ°Π²ΠΈΡ ΡΡΡ ΠΊΠΎΠ½ΡΡΡΡΠΊΡΠΈΡ Π½Π° ΡΠ΅Π³ΡΠ»ΡΡΠΎΡΠ½ΡΠΉ ΡΡΠ°ΡΡΠΎΠΊ β ΠΏΡΠΎΠΌΠΎΡΠΎΡ Π½ΡΠΆΠ½ΠΎΠ³ΠΎ Π³Π΅Π½Π°.
Π Π΅ΡΠ΅ ΠΎΠ΄ΠΈΠ½ ΠΈΠ½ΡΠ΅ΡΠ΅ΡΠ½ΡΠΉ ΠΈΠ½ΡΡΡΡΠΌΠ΅Π½Ρ β Π·Π°ΠΆΠΈΠΌ Ρ ΡΠΎΠ½Π°ΡΠΈΠΊΠΎΠΌ. ΠΡΠΈΠΊΡΠ΅ΠΏΠΈΠ² ΠΊ Π±Π΅Π»ΠΊΡ dCas9 Π·Π΅Π»Π΅Π½ΡΠΉ ΡΠ»ΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ΅Π½ΡΠ½ΡΠΉ Π±Π΅Π»ΠΎΠΊ EGFP, ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ ΠΏΠΎΠΌΠ΅ΡΠΈΡΡ ΠΈΠΌ ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»Π΅Π½Π½ΡΠΉ ΡΡΠ°ΡΡΠΎΠΊ Π² Ρ ΡΠΎΠΌΠΎΡΠΎΠΌΠ΅ ΠΆΠΈΠ²ΠΎΠΉ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΊΠΈ ΠΈ Π½Π°Π±Π»ΡΠ΄Π°ΡΡ ΠΏΠΎΠ΄ ΠΌΠΈΠΊΡΠΎΡΠΊΠΎΠΏΠΎΠΌ Π·Π° Π΅Π³ΠΎ ΡΡΠ΄ΡΠ±ΠΎΠΉ Π² ΡΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΊΠ»Π΅ΡΠΎΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΡΠΈΠΊΠ»Π° Π»ΠΈΠ±ΠΎ Π²ΠΈΠ·ΡΠ°Π»ΡΠ½ΠΎ ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»ΡΡΡ Π΄Π»ΠΈΠ½Ρ ΡΠ΅Π»ΠΎΠΌΠ΅Ρ (Cell, 2013, 155, 1479β1491).
Π§ΡΠΎ Π²ΠΏΠ΅ΡΠ΅Π΄ΠΈ?
ΠΡΠΎΡΠ΅ΡΠ½Π°Ρ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»ΡΡΠ½Π°Ρ ΠΌΠ°ΡΠΈΠ½Π°, Π·Π°ΡΠΈΡΠ°ΡΡΠ°Ρ Π±Π°ΠΊΡΠ΅ΡΠΈΠΈ ΠΎΡ Π²ΠΈΡΡΡΠΎΠ², Π° ΡΠ°ΠΊΠΆΠ΅ ΠΈΠ·ΠΎΠ±ΡΠ΅ΡΠ°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΡ ΠΈ Π½Π°Ρ ΠΎΠ΄ΡΠΈΠ²ΠΎΡΡΡ ΡΡΠ΅Π½ΡΡ ΠΏΠΎΠΌΠΎΠ³Π»ΠΈ ΡΠΎΠ²Π΅ΡΡΠΈΡΡ ΡΠ΅Π²ΠΎΠ»ΡΡΠΈΡ Π² Π³Π΅Π½Π½ΠΎΠΉ ΠΈΠ½ΠΆΠ΅Π½Π΅ΡΠΈΠΈ, ΡΡΡΠ΅ΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΠΎ ΡΠΏΡΠΎΡΡΠΈΠ² ΠΈ ΡΠ΄Π΅ΡΠ΅Π²ΠΈΠ² ΡΠ΅Ρ Π½ΠΈΠΊΡ ΡΠ΅Π΄Π°ΠΊΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ Π³Π΅Π½ΠΎΠΌΠ½ΠΎΠΉ ΠΠΠ. Π ΠΏΠ΅ΡΡΠΏΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π΅ ΡΡΠ° ΡΠ΅Ρ Π½ΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΡ ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ Π·Π½Π°ΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎ ΡΡΠΊΠΎΡΠΈΡΡ ΡΠ΅ΠΌΠΏΡ ΡΠ°Π·Π²ΠΈΡΠΈΡ ΡΠΊΡΠΏΠ΅ΡΠΈΠΌΠ΅Π½ΡΠ°Π»ΡΠ½ΠΎΠΉ Π±ΠΈΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΠΈ ΠΈ Π³Π΅Π½Π½ΠΎΠΉ ΡΠ΅ΡΠ°ΠΏΠΈΠΈ, ΠΏΠΎΠ΄Π°ΡΠΈΡ ΠΌΠ΅Π΄ΠΈΡΠΈΠ½Π΅ Β«ΡΠΌΠ½ΡΠ΅ Π°Π½ΡΠΈΠ±ΠΈΠΎΡΠΈΠΊΠΈΒ»; ΠΏΠΎΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ Π² ΠΏΡΠΎΠ΅ΠΊΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠΈ ΠΈ ΡΠΎΠ·Π΄Π°Π½ΠΈΠΈ Π³Π΅Π½Π½ΠΎ-ΠΌΠΎΠ΄ΠΈΡΠΈΡΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΡ ΡΠ΅Π»ΡΡΠΊΠΎΡ ΠΎΠ·ΡΠΉΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΡΡ ΠΆΠΈΠ²ΠΎΡΠ½ΡΡ ΠΈ ΡΠ°ΡΡΠ΅Π½ΠΈΠΉ, Π° ΡΠ°ΠΊΠΆΠ΅ ΠΏΡΠΎΠΌΡΡΠ»Π΅Π½Π½ΡΡ ΠΌΠΈΠΊΡΠΎΠΎΡΠ³Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΠΎΠ².
ΠΠΎ ΡΡΠΎΠ±Ρ ΡΠ΄Π΅Π»Π°ΡΡ ΡΠ΅Ρ Π½ΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΡ Π±Π΅Π·ΠΎΠΏΠ°ΡΠ½ΠΎΠΉ, Π½Π°Π΄ΠΎ ΠΈΡΠΊΠ»ΡΡΠΈΡΡ Π²ΡΠ΅ Π²ΠΎΠ·ΠΌΠΎΠΆΠ½ΡΠ΅ ΠΏΠΎΠ±ΠΎΡΠ½ΡΠ΅ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΡ β Π΄ΠΎΠ±ΠΈΡΡΡΡ, ΡΡΠΎΠ±Ρ ΠΊΠΎΠΌΠΏΠ»Π΅ΠΊΡ Cas9-sgΠ ΠΠ Π½Π°ΠΏΡΠ°Π²Π»ΡΠ»ΡΡ ΠΈΠΌΠ΅Π½Π½ΠΎ ΡΡΠ΄Π°, ΠΊΡΠ΄Π° ΠΌΡ Ρ ΠΎΡΠΈΠΌ Π΅Π³ΠΎ Π½Π°ΠΏΡΠ°Π²ΠΈΡΡ, ΠΈ Π΄Π΅Π»Π°Π» ΠΈΠΌΠ΅Π½Π½ΠΎ ΡΠΎ, ΡΡΠΎ ΠΎΡ Π½Π΅Π³ΠΎ ΡΡΠ΅Π±ΡΠ΅ΡΡΡ. ΠΠ»Ρ ΡΡΠΎΠ³ΠΎ Π΅Π³ΠΎ Π½ΡΠΆΠ½ΠΎ Π²ΡΠ΅ΡΡΠΎΡΠΎΠ½Π½Π΅ ΠΏΡΠΎΠ²Π΅ΡΠΈΡΡ Π² ΡΠ°ΠΌΡΡ ΡΠ°Π·Π½ΡΡ ΡΡΠ»ΠΎΠ²ΠΈΡΡ ΠΈ Π΄Π΅ΡΠ°Π»ΡΠ½ΠΎ ΠΏΡΠΎΡΡΠ½ΠΈΡΡ ΠΌΠ΅Ρ Π°Π½ΠΈΠΊΡ Π΅Π³ΠΎ Π΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΈΠΉ. ΠΡΠΌΠ°Π΅ΡΡΡ, ΡΡΠΎ Π²ΠΎΠ·ΠΌΠΎΠΆΠ½ΡΠ΅ ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅Π½Π΅Π½ΠΈΡ CRISPR-Cas9-ΡΠ΅Ρ Π½ΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΠΈ Π½Π΅ ΠΈΡΡΠ΅ΡΠΏΠ°Π½Ρ ΡΠ΅ΠΌΠΈ, ΠΎ ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΡ ΠΌΡ ΡΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ ΡΡΠΎ ΡΠ°ΡΡΠΊΠ°Π·Π°Π»ΠΈ.
ΠΠΎΠ½ΡΡΠΈΠ΅ ΠΎ Π³Π΅Π½Π΅. Π‘ΡΡΡΠΊΡΡΡΠ½ΡΠ΅ ΠΈ ΡΠ΅Π³ΡΠ»ΡΡΠΎΡΠ½ΡΠ΅ Π³Π΅Π½Ρ. ΠΠ΅Π½ΠΎΠΌΡ ΠΈ ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅ΡΡ
ΠΠΎΠ½ΡΡΠΈΠ΅ ΠΎ Π³Π΅Π½Π΅. Π‘ΡΡΡΠΊΡΡΡΠ½ΡΠ΅ ΠΈ ΡΠ΅Π³ΡΠ»ΡΡΠΎΡΠ½ΡΠ΅ Π³Π΅Π½Ρ. ΠΠ΅Π½ΠΎΠΌΡ ΠΈ ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅ΡΡ
ΠΠΎΠ½ΡΡΠΈΠ΅ ΠΎ Π³Π΅Π½Π΅
Π 1909 Π³ΠΎΠ΄Ρ Π΄Π°ΡΡΠΊΠΈΠΉ ΡΡΠ΅Π½ΡΠΉ Π. ΠΠΎΠ³Π°Π½ΡΠ΅Π½ ΠΏΡΠ΅Π΄Π»ΠΎΠΆΠΈΠ» ΡΠ΅ΡΠΌΠΈΠ½ Β«Π³Π΅Π½Β». ΠΠ΅Π½ β ΡΡΠΎ ΡΡΠ°ΡΡΠΎΠΊ ΠΠΠ Ρ ΡΠΎΠΌΠΎΡΠΎΠΌΡ, ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠΉ Π½Π΅ΡΠ΅Ρ ΠΈΠ½ΡΠΎΡΠΌΠ°ΡΠΈΡ ΠΎΠ± ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠΌ Π±Π΅Π»ΠΊΠ΅, ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»Π΅ ΡΡΠ°Π½ΡΠΏΠΎΡΡΠ½ΠΎΠΉ ΠΈΠ»ΠΈ ΡΠΈΠ±ΠΎΡΠΎΠΌΠ°Π»ΡΠ½ΠΎΠΉ Π ΠΠ. Π€ΡΠ½ΠΊΡΠΈΠΎΠ½Π°Π»ΡΠ½ΠΎ Π³Π΅Π½ ΠΏΡΠ΅Π΄ΡΡΠ°Π²Π»ΡΠ΅Ρ ΡΠΎΠ±ΠΎΠΉ ΡΠ΅Π»ΠΎΡΡΠ½ΡΡ Π΅Π΄ΠΈΠ½ΠΈΡΡ. ΠΠΎ Π³Π΅Π½ ΡΠΎΡΡΠΎΠΈΡ ΠΈΠ· ΠΎΡΠ΄Π΅Π»ΡΠ½ΡΡ ΡΠ°ΡΡΠ΅ΠΉ. ΠΠ΄Π½ΠΈ ΠΈΠ· ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΡ Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½Ρ β Ρ Π½ΠΈΡ ΠΊΠΎΠΏΠΈΡΡΠ΅ΡΡΡ Π ΠΠ β ΡΠΊΠ·ΠΎΠ½Ρ. Π‘ Π΄ΡΡΠ³ΠΈΡ β Π½Π΅ ΠΊΠΎΠΏΠΈΡΡΡΡΡΡ. ΠΠ½ΠΈ Π½Π°Π·ΡΠ²Π°ΡΡΡΡ ΠΈΠ½ΡΡΠΎΠ½Π°ΠΌΠΈ. ΠΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎ ΠΈΠ½ΡΡΠΎΠ½ΠΎΠ² Π² Π³Π΅Π½Π°Ρ ΡΠ°Π·Π½ΠΎΠ΅, ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠ΅ Π΄Π»Ρ ΠΊΠ°ΠΆΠ΄ΠΎΠ³ΠΎ Π³Π΅Π½Π°.
Π‘ΡΡΡΠΊΡΡΡΠ½ΡΠ΅ ΠΈ ΡΠ΅Π³ΡΠ»ΡΡΠΎΡΠ½ΡΠ΅ Π³Π΅Π½Ρ
Π‘ΡΡΠΎΠ΅Π½ΠΈΠ΅ Π³Π΅Π½ΠΎΠ² ΠΏΡΠΎΠΊΠ°ΡΠΈΠΎΡ. ΠΠΎΠ΄Π΅Π»Ρ ΠΎΠΏΠ΅ΡΠΎΠ½Π°, ΠΏΡΠ΅Π΄Π»ΠΎΠΆΠ΅Π½Π½Π°Ρ Π€. ΠΠ°ΠΊΠΎΠ±ΠΎΠΌ ΠΈ Π. Π. ΠΠΎΠ½ΠΎ
ΠΠ΅Π½Ρ Π±ΡΠ²Π°ΡΡ ΡΡΡΡΠΊΡΡΡΠ½ΡΠ΅ ΠΈ ΡΠ΅Π³ΡΠ»ΡΡΠΎΡΠ½ΡΠ΅. Π‘ΡΡΡΠΊΡΡΡΠ½ΡΠ΅ β ΡΡΠΎ Π³Π΅Π½Ρ, ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠ΅ ΠΊΠΎΠ΄ΠΈΡΡΡΡ ΡΡΡΡΠΊΡΡΡΡ ΡΠΈΠ±ΠΎΠ½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΈΠ½ΠΎΠ²ΡΡ ΠΊΠΈΡΠ»ΠΎΡ ΠΈ Π±Π΅Π»ΠΊΠΎΠ². ΠΠΌΠ΅ΡΡ Π±ΠΎΠ»ΡΡΠΈΠ΅ ΡΠ°Π·ΠΌΠ΅ΡΡ (ΡΠΎΡΠ½ΠΈ ΠΈ ΡΡΡΡΡΠΈ Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΎΠ²).
Π Π΅Π³ΡΠ»ΡΡΠΎΡΠ½ΡΠ΅ β ΡΡΠΎ Π³Π΅Π½Ρ, ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠ΅ ΡΠ»ΡΠΆΠ°Ρ ΠΌΠ΅ΡΡΠΎΠΌ ΠΏΡΠΈΡΠΎΠ΅Π΄ΠΈΠ½Π΅Π½ΠΈΡ ΡΠ΅ΡΠΌΠ΅Π½ΡΠΎΠ² ΠΈΠ»ΠΈ Π±ΠΈΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈ Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΡΡ ΡΠΎΠ΅Π΄ΠΈΠ½Π΅Π½ΠΈΠΉ, ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠ΅ Π²Π»ΠΈΡΡΡ Π½Π° Π°ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡ ΡΡΡΡΠΊΡΡΡΠ½ΡΡ Π³Π΅Π½ΠΎΠ², ΠΏΡΠΈΠ½ΠΈΠΌΠ°ΡΡ ΡΡΠ°ΡΡΠΈΠ΅ Π² ΠΏΡΠΎΡΠ΅ΡΡΠ°Ρ ΡΠ΄Π²ΠΎΠ΅Π½ΠΈΡ ΠΠΠ ΠΈ ΡΡΠ°Π½ΡΠΊΡΠΈΠΏΡΠΈΠΈ. ΠΠΌΠ΅ΡΡ Π½Π΅Π·Π½Π°ΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΡΠ΅ ΡΠ°Π·ΠΌΠ΅ΡΡ (Π΄ΠΎ Π½Π΅ΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΠΈΡ ΠΏΠ°ΡΠΎΠ² Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΎΠ²).
ΠΠ΅Π½ΠΎΠΌΡ ΠΈ ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅ΡΡ
Π‘ΡΡΠΎΠ΅Π½ΠΈΠ΅ Π³Π΅Π½ΠΎΠ² ΡΡΠΊΠ°ΡΠΈΠΎΡ
ΠΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎ Π³Π΅Π½ΠΎΠ² Ρ ΡΠ°Π·Π½ΡΡ ΠΎΡΠ³Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΠΎΠ² ΡΠ°Π·Π½ΠΎΠ΅. Π‘ΠΎΠ²ΠΎΠΊΡΠΏΠ½ΠΎΡΡΡ Π³Π΅Π½ΠΎΠ² Π² Π³Π°ΠΏΠ»ΠΎΠΈΠ΄Π½ΠΎΠΌ Π½Π°Π±ΠΎΡΠ΅, Ρ Π°ΡΠ°ΠΊΡΠ΅ΡΠ½ΠΎΠ΅ Π΄Π»Ρ ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»Π΅Π½Π½ΠΎΠ³ΠΎ Π²ΠΈΠ΄Π°, Π½Π°Π·ΡΠ²Π°Π΅ΡΡΡ Π³Π΅Π½ΠΎΠΌΠΎΠΌ.
ΠΡΠΎΡΡΠ΅ΠΉΡΠΈΠΌΠΈ Π³Π΅Π½ΠΎΠΌΠ°ΠΌΠΈ ΡΠ²Π»ΡΡΡΡΡ Π³Π΅Π½ΠΎΠΌΡ Π²ΠΈΡΡΡΠΎΠ². Π‘ΠΎΡΡΠΎΡΡ Π»ΠΈΡΡ ΠΈΠ· ΡΡΡΡΠΊΡΡΡΠ½ΡΡ Π³Π΅Π½ΠΎΠ².
ΠΠ΅Π½ΠΎΠΌΡ ΠΏΡΠΎΠΊΠ°ΡΠΈΠΎΡ ΠΈΠΌΠ΅ΡΡ ΠΈ ΡΡΡΡΠΊΡΡΡΠ½ΡΠ΅, ΠΈ ΡΠ΅Π³ΡΠ»ΡΡΠΎΡΠ½ΡΠ΅ Π³Π΅Π½Ρ. ΠΠΎΠ»ΠΎΠ²ΠΈΠ½Π° Π΄Π»ΠΈΠ½Ρ ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»Ρ Π½Π΅ Π½Π΅ΡΠ΅Ρ ΠΈΠ½ΡΠΎΡΠΌΠ°ΡΠΈΠΈ, ΡΠ°ΠΊ ΠΊΠ°ΠΊ ΡΡΠ°ΡΡΠΊΠΈ ΠΌΠ΅ΠΆΠ΄Ρ Π³Π΅Π½Π°ΠΌΠΈ β ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅ΡΡ β Β«ΡΠ°Π·Π΄Π΅Π»ΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΡΠ΅ Π·Π½Π°ΠΊΠΈΒ».
ΠΠ΅Π½ΠΎΠΌΡ ΡΡΠΊΠ°ΡΠΈΠΎΡ ΠΈΠΌΠ΅ΡΡ Π½Π°ΠΈΠ±ΠΎΠ»Π΅Π΅ ΡΠ»ΠΎΠΆΠ½ΡΡ ΡΡΡΡΠΊΡΡΡΡ. Π Π½ΠΈΡ Π±ΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π΅ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎ ΠΠΠ, ΠΏΠΎΡΡΠΎΠΌΡ ΠΌΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΈ ΡΡΡΡΠΊΡΡΡΠ½ΡΡ , ΠΈ ΡΠ΅Π³ΡΠ»ΡΡΠΎΡΠ½ΡΡ Π³Π΅Π½ΠΎΠ². ΠΠ°ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅Ρ, Ρ Π΄ΡΠΎΠ·ΠΎΡΠΈΠ»Ρ Π² Π³Π΅Π½ΠΎΠΌΠ΅ Π΅ΡΡΡ ΠΎΠΊΠΎΠ»ΠΎ 180 000 000 ΠΏΠ°Ρ Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΎΠ², ΡΡΡΡΠΊΡΡΡΠ½ΡΡ Π³Π΅Π½ΠΎΠ² β ΠΏΠΎΡΡΠΈ 10 ΡΡΡ. Π Π³Π΅Π½ΠΎΠΌΠ°Ρ ΠΎΡΠ³Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌΠΎΠ² ΡΡΠΊΠ°ΡΠΈΠΎΡ ΠΊΠΎΠ»ΠΈΡΠ΅ΡΡΠ²ΠΎ ΠΠΠ Π²ΡΠ΅Π³Π΄Π° Π·Π½Π°ΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎ Π±ΠΎΠ»ΡΡΠ΅ Π½Π΅ΠΎΠ±Ρ ΠΎΠ΄ΠΈΠΌΠΎΠ³ΠΎ Π΄Π»Ρ ΠΊΠΎΠ΄ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ (Π² 8-10 ΡΠ°Π·). ΠΡΠΈΡΠΈΠ½Ρ ΡΠ°Π·Π½ΡΠ΅. ΠΠΎΠ³ΡΡ ΠΌΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΡΠ°Π· ΠΏΠΎΠ²ΡΠΎΡΡΡΡΡΡ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ Π½ΡΠΊΠ»Π΅ΠΎΡΠΈΠ΄ΠΎΠ². Π ΠΌΠΎΠ»Π΅ΠΊΡΠ»Π°Ρ ΠΠΠ Π²ΡΠ΅Π³Π΄Π° ΠΌΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΡΡΠ°ΡΡΠΊΠΎΠ², ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠ΅ Π½Π΅ Π½Π΅ΡΡΡ ΠΈΠ½ΡΠΎΡΠΌΠ°ΡΠΈΠΈ (ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅ΡΡ).
Π§ΡΠΎ ΡΠ°ΠΊΠΎΠ΅ ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅Ρ?
Π§ΡΠΎ ΡΠ°ΠΊΠΎΠ΅ ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅Ρ?
Π‘ΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅Ρ β ΡΡΠΎ Π²ΡΠΏΠΎΠΌΠΎΠ³Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΠ΅ ΡΡΡΡΠΎΠΉΡΡΠ²ΠΎ Π΄Π»Ρ ΠΈΠ½Π³Π°Π»ΡΡΠΈΠΉ, ΠΊΠ°ΠΌΠ΅ΡΠ°, ΠΊΠΎΡΠΎΡΠ°Ρ ΡΠ»ΡΠΆΠΈΡ ΠΏΡΠΎΠΌΠ΅ΠΆΡΡΠΎΡΠ½ΡΠΌ ΡΠ΅Π·Π΅ΡΠ²ΡΠ°ΡΠΎΠΌ Π΄Π»Ρ Π°ΡΡΠΎΠ·ΠΎΠ»ΠΈ Π»Π΅ΠΊΠ°ΡΡΡΠ²Π°. ΠΠ΅ΠΊΠ°ΡΡΡΠ²ΠΎ ΠΈΠ· Π±Π°Π»Π»ΠΎΠ½ΡΠΈΠΊΠ° ΠΈΠ½Π³Π°Π»ΡΡΠΎΡΠ° ΠΏΠΎΡΡΡΠΏΠ°Π΅Ρ Π² ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅Ρ, Π° Π·Π°ΡΠ΅ΠΌ Π²Π΄ΡΡ Π°Π΅ΡΡΡ ΠΏΠ°ΡΠΈΠ΅Π½ΡΠΎΠΌ.
ΠΠ»Ρ ΡΠ΅Π³ΠΎ Π½ΡΠΆΠ΅Π½ ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅Ρ?
ΠΠ΄ΠΈΠ½ΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΠΎΠ΅ ΠΏΡΠ΅Π΄Π½Π°Π·Π½Π°ΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅ΡΠ° β ΠΎΠ±Π΅ΡΠΏΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΌΠ°ΠΊΡΠΈΠΌΠ°Π»ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΠΈ ΠΈ Π±Π΅Π·ΠΎΠΏΠ°ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ ΠΏΡΠΈ ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅Π½Π΅Π½ΠΈΠΈ Π΄ΠΎΠ·ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΡ Π°ΡΡΠΎΠ·ΠΎΠ»ΡΠ½ΡΡ ΠΈΠ½Π³Π°Π»ΡΡΠΎΡΠΎΠ². ΠΡΠΎΠ±Π΅Π½Π½ΠΎ Π²Π΅Π»ΠΈΠΊΠ° ΡΠΎΠ»Ρ ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅ΡΠ° Π² ΡΠΎΠΌ ΡΠ»ΡΡΠ°Π΅, ΠΊΠΎΠ³Π΄Π° ΡΠ΅ΡΡ ΠΈΠ΄Π΅Ρ ΠΎΠ± ΠΈΠ½Π³Π°Π»ΡΡΠΈΠΎΠ½Π½ΡΡ Π³ΠΎΡΠΌΠΎΠ½Π°Π»ΡΠ½ΡΡ ΠΏΡΠ΅ΠΏΠ°ΡΠ°ΡΠ°Ρ . ΠΡΠ»ΠΈ ΠΆΠ΅ Π½Π°Π·Π½Π°ΡΠ΅Π½Π½ΠΎΠ΅ Π»Π΅ΠΊΠ°ΡΡΡΠ²ΠΎ β Π½Π΅ Π°ΡΡΠΎΠ·ΠΎΠ»Ρ, Π° ΡΡΡ ΠΎΠΉ ΠΏΠΎΡΠΎΡΠΎΠΊ, ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅Ρ Π½Π΅ ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅Π½ΡΠ΅ΡΡΡ.
Π ΠΊΠ°ΠΊΠΈΡ ΡΠ»ΡΡΠ°ΡΡ ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅Ρ ΠΎΡΠΎΠ±Π΅Π½Π½ΠΎ Π½Π΅ΠΎΠ±Ρ ΠΎΠ΄ΠΈΠΌ?
*ΠΠ°ΡΠΈΠ΅Π½ΡΠ°ΠΌ, ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠΌ Π²ΠΏΠ΅ΡΠ²ΡΠ΅ Π½Π°Π·Π½Π°ΡΠ΅Π½Ρ Π°ΡΡΠΎΠ·ΠΎΠ»ΡΠ½ΡΠ΅ ΠΈΠ½Π³Π°Π»ΡΡΠΎΡΡ
*ΠΠ΅ΡΡΠΌ
*ΠΠΎΠΆΠΈΠ»ΡΠΌ
*ΠΠ°ΡΠΈΠ΅Π½ΡΠ°ΠΌ Π»ΡΠ±ΠΎΠ³ΠΎ Π²ΠΎΠ·ΡΠ°ΡΡΠ° Ρ ΠΏΠ»ΠΎΡ
ΠΎΠΉ ΠΈΠ½Π³Π°Π»ΡΡΠΈΠΎΠ½Π½ΠΎΠΉ ΡΠ΅Ρ
Π½ΠΈΠΊΠΎΠΉ
*ΠΠ°ΡΠΈΠ΅Π½ΡΠ°ΠΌ, ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ°ΡΡΠΈΠΌ Π²ΡΡΠΎΠΊΠΈΠ΅ Π΄ΠΎΠ·Ρ ΠΏΡΠ΅ΠΏΠ°ΡΠ°ΡΠΎΠ²
*ΠΠ°ΡΠΈΠ΅Π½ΡΠ°ΠΌ, ΠΏΠΎΠ»ΡΡΠ°ΡΡΠΈΠΌ ΠΈΠ½Π³Π°Π»ΡΡΠΈΠΎΠ½Π½ΡΠ΅ Π³ΠΎΡΠΌΠΎΠ½Π°Π»ΡΠ½ΡΠ΅ ΠΏΡΠ΅ΠΏΠ°ΡΠ°ΡΡ
*ΠΠ°ΡΠΈΠ΅Π½ΡΠ°ΠΌ Ρ Π½ΠΎΡΠ½ΠΎΠΉ Π°ΡΡΠΌΠΎΠΉ
*ΠΠ°ΡΠΈΠ΅Π½ΡΠ°ΠΌ, ΡΠΊΠ»ΠΎΠ½Π½ΡΠΌ ΠΊ Π±ΡΡΡΡΠΎΠΌΡ ΡΠ°Π·Π²ΠΈΡΠΈΡ ΡΡΠΆΠ΅Π»ΡΡ
ΠΏΡΠΈΡΡΡΠΏΠΎΠ² ΡΠ΄ΡΡΡΡ
Π ΡΠ΅ΠΌ ΡΡΡΡ Π΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΈΡ ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅ΡΠ°?
Π‘Π°ΠΌΡΠ΅ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΡΠ΅ Π»Π΅ΠΊΠ°ΡΡΡΠ²Π° ΠΏΡΠΈ Π±ΡΠΎΠ½Ρ ΠΈΠ°Π»ΡΠ½ΠΎΠΉ Π°ΡΡΠΌΠ΅ ΠΈ Ρ ΡΠΎΠ½ΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠΌ ΠΎΠ±ΡΡΡΡΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΠΌ Π±ΡΠΎΠ½Ρ ΠΈΡΠ΅ Π½Π°Π·Π½Π°ΡΠ°ΡΡΡΡ ΠΈΠ½Π³Π°Π»ΡΡΠΈΠΎΠ½Π½ΠΎ. ΠΠ½ΠΈ ΡΠΏΠ΅ΡΠΈΠ°Π»ΡΠ½ΠΎ ΡΠ°Π·ΡΠ°Π±ΠΎΡΠ°Π½Ρ ΡΠ°ΠΊ, ΡΡΠΎΠ±Ρ Π±ΡΡΡ ΠΌΠ°ΠΊΡΠΈΠΌΠ°Π»ΡΠ½ΠΎ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΡΠΌΠΈ ΠΌΠ΅ΡΡΠ½ΠΎ (ΡΠΎΠΏΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈΠΌΠΈ), ΠΈ ΠΊΠ°ΠΊ ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ ΠΌΠ΅Π½ΡΡΠ΅ Π²Π»ΠΈΡΡΡ Π½Π° Π²Π΅ΡΡ ΠΎΡΠ³Π°Π½ΠΈΠ·ΠΌ (ΠΌΠΈΠ½ΠΈΠΌΠ°Π»ΡΠ½ΠΎΠ΅ ΡΠΈΡΡΠ΅ΠΌΠ½ΠΎΠ΅ Π΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΈΠ΅). ΠΠΎ-ΡΡΠΎΠΌΡ ΠΏΠ΅ΡΠ²ΠΎΡΡΠ΅ΠΏΠ΅Π½Π½ΠΎΠ΅ Π·Π½Π°ΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΏΡΠΈΠΎΠ±ΡΠ΅ΡΠ°Π΅Ρ ΠΎΠ±Π΅ΡΠΏΠ΅ΡΠ΅Π½ΠΈΠ΅ Π½Π΅ΠΏΠΎΡΡΠ΅Π΄ΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΏΠΎΠΏΠ°Π΄Π°Π½ΠΈΡ Π»Π΅ΠΊΠ°ΡΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΠΎΠ³ΠΎ Π²Π΅ΡΠ΅ΡΡΠ²Π° ΠΊ ΠΌΠ΅ΡΡΡ ΡΠ²ΠΎΠ΅Π³ΠΎ Π΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΈΡ, Ρ.Π΅. Π² Π±ΡΠΎΠ½Ρ ΠΈ.
ΠΠ»Ρ ΡΡΠΎΠ³ΠΎ Π½Π΅ΠΎΠ±Ρ ΠΎΠ΄ΠΈΠΌΡ ΡΠ»Π΅Π΄ΡΡΡΠΈΠ΅ ΡΡΠ»ΠΎΠ²ΠΈΡ: Π²ΠΎ-ΠΏΠ΅ΡΠ²ΡΡ , ΡΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ ΡΠ°ΡΡΠΈΡΡ ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»Π΅Π½Π½ΠΎΠ³ΠΎ ΡΠ°Π·ΠΌΠ΅ΡΠ° (2-5 ΠΌΠΊΠΌ, ΡΠ°ΠΊ Π½Π°Π·ΡΠ²Π°Π΅ΠΌΠ°Ρ ΡΠ΅ΡΠΏΠΈΡΠ°Π±Π΅Π»ΡΠ½Π°Ρ ΡΡΠ°ΠΊΡΠΈΡ) ΠΏΠΎΠΏΠ°-Π΄Π°ΡΡ Π² Π½ΠΈΠΆΠ½ΠΈΠ΅ Π΄ΡΡ Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΡΠ΅ ΠΏΡΡΠΈ. ΠΠΎΠ»Π΅Π΅ ΠΊΡΡΠΏΠ½ΡΠ΅ ΠΎΡΠ°ΠΆΠ΄Π°ΡΡΡΡ Π² Π³Π»ΠΎΡΠΊΠ΅, Π³ΠΎΡΡΠ°Π½ΠΈ ΠΈ ΡΡΠ°Ρ Π΅Π΅, Π° Π±ΠΎΠ»Π΅Π΅ ΠΌΠ΅Π»ΠΊΠΈΠ΅ β Π² Π°Π»ΡΠ²Π΅ΠΎΠ»Π°Ρ , ΠΈΠ»ΠΈ Π²ΠΎΠΎΠ±ΡΠ΅ Π½Π΅ Π·Π°Π΄Π΅ΡΠΆΠΈΠ²Π°ΡΡΡΡ Π² Π»Π΅Π³ΠΊΠΈΡ . ΠΠΎ-Π²ΡΠΎΡΡΡ , ΠΏΠ°ΡΠΈΠ΅Π½Ρ Π΄ΠΎΠ»ΠΆΠ΅Π½ ΡΠ΄Π΅Π»Π°ΡΡ Π΄ΠΎΡΡΠ°ΡΠΎΡΠ½ΠΎ ΡΠΈΠ»ΡΠ½ΡΠΉ ΠΈ Π³Π»ΡΠ±ΠΎΠΊΠΈΠΉ Π²Π΄ΠΎΡ . Π ΡΡΠ΅ΡΡΠΈΡ , Π²ΡΡ ΠΎΠ΄ Π»Π΅ΠΊΠ°ΡΡΡΠ²Π° ΠΈ Π²Π΄ΠΎΡ Π΄ΠΎΠ»ΠΆΠ½Ρ ΡΠΎΠ²ΠΏΠ°Π΄Π°ΡΡ.
Π‘Π°ΠΌΡΠΌΠΈ ΠΏΠΎΠΏΡΠ»ΡΡΠ½ΡΠΌΠΈ ΠΈ Π΄ΠΎΡΡΡΠΏΠ½ΡΠΌΠΈ ΠΈΠ½Π³Π°Π»ΡΡΠΈΠΎΠ½Π½ΡΠΌΠΈ ΠΏΡΠ΅ΠΏΠ°ΡΠ°ΡΠ°ΠΌΠΈ ΡΠ²Π»ΡΡΡΡΡ Π΄ΠΎΠ·ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΠ΅ Π°ΡΡΠΎΠ·ΠΎΠ»ΡΠ½ΡΠ΅ ΠΈΠ½Π³Π°Π»ΡΡΠΎΡΡ. ΠΠΎ ΠΈΡ ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅Π½Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΠΎΠΏΡΡΠΆΠ΅Π½ΠΎ Ρ Π½Π΅ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠΌΠΈ ΡΡΡΠ΄Π½ΠΎΡΡΡΠΌΠΈ. ΠΠΎΠ·Π½ΠΈΠΊΠ°ΡΡΠ°Ρ ΠΏΡΠΈ Π½Π°ΠΆΠ°ΡΠΈΠΈ Π½Π° Π±Π°Π»Π»ΠΎΠ½ΡΠΈΠΊ ΡΡΡΡΡ Π°ΡΡΠΎΠ·ΠΎΠ»Ρ ΠΈΠΌΠ΅Π΅Ρ Π²ΡΡΠΎΠΊΡΡ Π½Π°ΡΠ°Π»ΡΠ½ΡΡ ΡΠΊΠΎΡΠΎΡΡΡ β Π±ΠΎΠ»Π΅Π΅ 100 ΠΊΠΌ/ΡΠ°Ρ, ΡΠΊΠΎ-ΡΠΎΡΡΡ Π²Π΄ΠΎΡ Π° Π³ΠΎΡΠ°Π·Π΄ΠΎ ΠΌΠ΅Π½ΡΡΠ΅ β ΠΈ ΡΠΎΡΡΠΎΠΈΡ ΠΈΠ· ΡΠΌΠ΅ΡΠΈ ΡΠ°ΡΡΠΈΡ Π±ΠΎΠ»Π΅Π΅ ΠΊΡΡΠΏΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΈ Π±ΠΎΠ»Π΅Π΅ ΠΌΠ΅Π»ΠΊΠΎΠ³ΠΎ ΡΠ°Π·ΠΌΠ΅ΡΠ°. ΠΡΠΎ ΠΏΡΠΈΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΡ ΠΊ ΡΠΎΠΌΡ, ΡΡΠΎ Π±ΠΎΠ»ΡΡΠ°Ρ ΡΠ°ΡΡΡ Π΄ΠΎΠ·Ρ ΠΏΡΠ΅ΠΏΠ°ΡΠ°ΡΠ° ΠΎΡΠ΅-Π΄Π°Π΅Ρ Π½Π° Π·Π°Π΄Π½Π΅ΠΉ ΡΡΠ΅Π½ΠΊΠ΅ Π³Π»ΠΎΡΠΊΠΈ ΠΈ ΠΏΡΠΎΠ³Π»Π°ΡΡΠ²Π°Π΅ΡΡΡ. Π’ΡΠ΅Π±ΡΠ΅ΡΡΡ ΠΊΠΎΠΎΡΠ΄ΠΈΠ½Π°ΡΠΈΡ Π²Π΄ΠΎΡ Π° ΠΈ Π½Π°ΠΆΠ°ΡΠΈΡ Π½Π° Π±Π°Π»Π»ΠΎΠ½ΡΠΈΠΊ, ΡΡΠΎ ΡΠ°ΠΌΠΎ ΠΏΠΎ ΡΠ΅Π±Π΅ ΡΠ»ΠΎΠΆΠ½ΠΎ, Π° Ρ Π½Π΅ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΡ ΠΏΠ°ΡΠΈΠ΅Π½ΡΠΎΠ² Π²Π΄ΠΎΡ ΡΠ΅ΡΠ»Π΅ΠΊΡΠΎΡΠ½ΠΎ ΠΏΡΠ΅ΡΡΠ²Π°Π΅ΡΡΡ. ΠΠΎ Π΄Π°Π½Π½ΡΠΌ ΡΠ°Π·Π½ΡΡ ΠΈΡΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠΉ, ΠΏΡΠ°Π²ΠΈΠ»ΡΠ½ΠΎ ΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΡΡΡΡ Π΄ΠΎΠ·ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΠΌ ΠΈΠ½Π³Π°Π»ΡΡΠΎΡΠΎΠΌ ΡΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ 20-40% ΠΏΠ°ΡΠΈΠ΅Π½ΡΠΎΠ² (Π΄Π°ΠΆΠ΅ Β«ΡΠΎ ΡΡΠ°ΠΆΠ΅ΠΌΒ»), Π·Π°ΡΠΎ ΡΠ΅Ρ , ΠΊΡΠΎ ΡΠ²Π΅ΡΠ΅Π½, ΡΡΠΎ Π²ΡΠ΅ Π΄Π΅Π»Π°Π΅Ρ ΠΏΡΠ°Π²ΠΈΠ»ΡΠ½ΠΎ, Π²ΠΎ ΠΌΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΡΠ°Π· Π±ΠΎΠ»ΡΡΠ΅.
ΠΠ°Π΄Π°ΡΠ° ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅ΡΠ° β ΡΡΡΡΠ°Π½ΠΈΡΡ ΡΡΡΠ΄Π½ΠΎΡΡΠΈ ΠΈ ΠΏΡΠΎΠ±Π»Π΅ΠΌΡ. ΠΠ½ ΡΠΎΡΠΌΠΎΠ·ΠΈΡ ΡΠΊΠΎΡΠΎΡΡΡ Π΄Π²ΠΈΠΆΠ΅Π½ΠΈΡ Π°ΡΡΠΎΠ·ΠΎΠ»ΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΎΠ±Π»Π°ΠΊΠ°, ΠΊΡΡΠΏΠ½ΡΠ΅ ΡΠ°ΡΡΠΈΡΡ ΠΎΡΠ΅Π΄Π°ΡΡ Π½Π° ΡΡΠ΅Π½ΠΊΠ°Ρ . ΠΠΎΠΎΡΠ΄ΠΈΠ½Π°ΡΠΈΠΈ Π²Π΄ΠΎΡ Π° ΠΈ Π½Π°ΠΆΠ°ΡΠΈΡ Π½Π΅ ΡΡΠ΅Π±ΡΠ΅ΡΡΡ. ΠΡΠΎΠΌΠ΅ ΡΠΎΠ³ΠΎ, ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅Ρ Ρ ΠΌΠ°ΡΠΊΠΎΠΉ ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΡΠ΅Ρ ΠΏΡΠΎΠ²Π΅ΡΡΠΈ ΠΈΠ½Π³Π°Π»ΡΡΠΈΡ ΠΏΡΠ°ΠΊΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈ Π² Π»ΡΠ±ΠΎΠΉ ΡΠΈΡΡΠ°ΡΠΈΠΈ, ΠΊΠΎΠ³Π΄Π° ΡΠΎΡ ΡΠ°Π½ΡΠ΅ΡΡΡ ΡΠ°ΠΌΠΎΡΡΠΎΡΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΠ΅ Π΄ΡΡ Π°Π½ΠΈΠ΅, Π½Π°ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅Ρ ΠΏΡΠΈ ΡΡΠΆΠ΅Π»ΠΎΠΌ ΠΏΡΠΈΡΡΡΠΏΠ΅ Π°ΡΡΠΌΡ. Π‘ ΠΏΠΎΠΌΠΎΡΡΡ ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅ΡΠ° ΡΡΠ°Π½ΠΎΠ²ΡΡΡΡ Π²ΠΎΠ·ΠΌΠΎΠΆΠ½ΡΠΌΠΈ ΠΈΠ½Π³Π°Π»ΡΡΠΈΠΈ Ρ Π΄Π΅ΡΠ΅ΠΉ, ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠ΅ ΡΠ»ΠΈΡΠΊΠΎΠΌ ΠΌΠ°Π»Ρ, ΡΡΠΎΠ±Ρ Π½Π΅ΠΏΠΎΡΡΠ΅Π΄ΡΡΠ²Π΅Π½Π½ΠΎ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°ΡΡ ΠΈΠ½Π³Π°Π»ΡΡΠΎΡΡ. Π‘ΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅Ρ ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ Π½ΠΎΡΠΈΡΡ Ρ ΡΠΎΠ±ΠΎΠΉ (Π½Π΅ ΠΊΠ°ΠΆΠ΄ΡΠΉ ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ ΡΠ΅Π±Π΅ ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΠΈΡΡ ΠΈΠΌΠ΅ΡΡ ΠΏΠΎΡΡΠ°ΡΠΈΠ²Π½ΡΡ Π°ΠΊΠΊΡΠΌΡΠ»ΡΡΠΎΡΠ½ΡΡ ΠΌΠΎΠ΄Π΅Π»Ρ Π½Π΅Π±ΡΠ»Π°ΠΉΠ·Π΅ΡΠ°).
ΠΠΈΠ½ΠΈΠΌΠ°Π»ΡΠ½Π°Ρ Π΄Π»ΠΈΠ½Π° β 5 ΡΠΌ, Π½ΠΎ ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅ΡΡ Π±ΠΎΠ»ΡΡΠ΅Π³ΠΎ ΠΎΠ±ΡΠ΅ΠΌΠ° Π±ΠΎΠ»Π΅Π΅ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½Ρ.
Π§ΡΠΎΠ±Ρ Π±ΡΡΡ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΡΠΌ, ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅Ρ Π΄ΠΎΠ»ΠΆΠ΅Π½ ΠΈΠΌΠ΅ΡΡ Π±ΠΎΠ»ΡΡΠΎΠΉ ΠΎΠ±ΡΠ΅ΠΌ, Π½ΠΎ ΡΠΎΠ³Π΄Π° Π΅Π³ΠΎ Π½Π΅ΡΠ΄ΠΎΠ±Π½ΠΎ Π½ΠΎΡΠΈΡΡ Ρ ΡΠΎΠ±ΠΎΠΉ. ΠΠΎΠ»ΡΡΠΈΠ½ΡΡΠ²ΠΎ ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅ΡΠΎΠ² Π±ΠΎΠ»ΡΡΠΎΠ³ΠΎ ΠΎΠ±ΡΠ΅ΠΌΠ° ΡΠΊΠ»Π°Π΄Π½ΡΠ΅, Π½ΠΎ ΡΠ΅ΠΌ Π½Π΅ ΠΌΠ΅Π½Π΅Π΅ Π·Π°Π½ΠΈΠΌΠ°ΡΡ ΠΌΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΠΌΠ΅ΡΡΠ°. ΠΠΎΡΡΠΎΠΌΡ ΡΠΎΠ·Π΄Π°Π½Ρ ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅ΡΡ, ΡΠΎΡΠΌΠ° ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΡ Π°ΡΡΠΎΠ΄ΠΈΠ½Π°ΠΌΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈ Π²ΡΠ²Π΅ΡΠ΅Π½Π° ΡΠ°ΠΊ, ΡΡΠΎΠ±Ρ ΡΠΊΠΎΡΠΎΡΡΡ Π΄Π²ΠΈΠΆΠ΅Π½ΠΈΡ ΡΡΡΡΠΈ Π°ΡΡΠΎΠ·ΠΎΠ»Ρ ΠΈ ΡΠ°Π·ΠΌΠ΅Ρ ΡΠ°ΡΡΠΈΡ Π±ΡΠ»ΠΈ ΠΈΠ΄Π΅Π°Π»ΡΠ½ΡΠΌΠΈ. Π’Π°ΠΊΠΈΠΌ ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅ΡΠ°ΠΌ ΠΎΠ³ΡΠΎΠΌΠ½ΡΠ΅ ΡΠ°Π·ΠΌΠ΅ΡΡ ΡΠΆΠ΅ Π½Π΅ Π½ΡΠΆΠ½Ρ.
ΠΡΠ»ΠΈ ΠΡ Π² ΡΠΎΡΡΠΎΡΠ½ΠΈΠΈ ΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°ΡΡΡΡ ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅ΡΠΎΠΌ Π±Π΅Π· ΠΌΠ°ΡΠΊΠΈ, ΡΠΎ Π»ΡΡΡΠ΅ Π΄Π΅Π»Π°ΡΡ ΠΈΠΌΠ΅Π½Π½ΠΎ ΡΠ°ΠΊ, ΠΏΠΎΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΡ ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅Π½Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΠΌΠ°ΡΠΊΠΈ ΡΠΌΠ΅Π½ΡΡΠ°Π΅Ρ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½ΠΎΡΡΡ Π»Π΅ΡΠ΅Π½ΠΈΡ: ΡΠ°ΡΡΡ ΠΏΡΠ΅ΠΏΠ°ΡΠ°ΡΠ° ΠΎΡΠ°ΠΆΠ΄Π°Π΅ΡΡΡ Π½Π° Π»ΠΈΡΠ΅. ΠΠ°ΡΠΊΠ° ΡΠ²Π»ΡΠ΅ΡΡΡ Π½Π΅ΠΎΠ±Ρ ΠΎΠ΄ΠΈΠΌΠΎΡΡΡΡ Ρ Π΄Π΅ΡΠ΅ΠΉ Π΄ΠΎ 5 Π»Π΅Ρ, ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠ΅ Π΅ΡΠ΅ Π½Π΅ Π² ΡΠΎΡΡΠΎΡΠ½ΠΈΠΈ ΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°ΡΡΡΡ ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅Π½ΡΡΡΡΡ ΠΎΠ±ΡΡΠ½ΠΎ Ρ Π΄Π΅ΡΠ΅ΠΉ Π΄ΠΎ 5 Π»Π΅Ρ, ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ ΠΏΠΎΠ½Π°Π΄ΠΎΠ±ΠΈΡΡΡΡ Π΄Π»Ρ ΠΎΡΠ»Π°Π±Π»Π΅Π½Π½ΡΡ ΠΈ ΠΏΠΎΠΆΠΈΠ»ΡΡ Π±ΠΎΠ»ΡΠ½ΡΡ , Π° ΡΠ°ΠΊΠΆΠ΅ ΠΏΠ°ΡΠΈΠ΅Π½ΡΠΎΠ² Π² ΡΡΠΆΠ΅Π»ΠΎΠΌ ΡΠΎΡΡΠΎΡΠ½ΠΈΠΈ. ΠΠ΅ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠΌ Π±ΠΎΠ»ΡΠ½ΡΠΌ ΠΌΠ°ΡΠΊΠ° ΡΡΠ΅Π±ΡΠ΅ΡΡΡ ΠΏΡΠΈΡ ΠΎΠ»ΠΎΠ³ΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈ.
Π‘Π°ΠΌΡΠ΅ ΡΠΎΠ²Π΅ΡΡΠ΅Π½Π½ΡΠ΅ ΠΌΠΎΠ΄Π΅Π»ΠΈ ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅ΡΠΎΠ² ΠΈΠΌΠ΅ΡΡ ΠΊΠ»Π°ΠΏΠ°Π½Ρ. ΠΡΠΎ ΠΏΡΠ΅Π΄ΡΠΏΡΠ΅ΠΆΠ΄Π°Π΅Ρ ΠΏΠΎΡΠ΅ΡΠΈ Π°ΡΡΠΎΠ·ΠΎΠ»Ρ ΠΈ ΠΎΠ±Π»Π΅Π³ΡΠ°Π΅Ρ ΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅, ΠΏΠΎΠ·Π²ΠΎΠ»ΡΡ Π΄Π΅Π»Π°ΡΡ Π½Π΅ΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ Π²Π΄ΠΎΡ ΠΎΠ² ΠΈΠ· ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅ΡΠ°. ΠΠ»Ρ Π΄Π΅ΡΠ΅ΠΉ ΡΠ΅ΠΊΠΎΠΌΠ΅Π½Π΄ΡΠ΅ΡΡΡ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°ΡΡ ΡΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ ΠΊΠ»Π°ΠΏΠ°Π½Π½ΡΠ΅ ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅ΡΡ.
Π ΡΠ»ΡΡΠ°Π΅ Ρ Π³ΠΎΡΠΌΠΎΠ½Π°Π»ΡΠ½ΡΠΌΠΈ ΠΈΠ½Π³Π°Π»ΡΡΠΈΠΎΠ½Π½ΡΠΌΠΈ ΠΏΡΠ΅ΠΏΠ°ΡΠ°ΡΠ°ΠΌΠΈ ΠΏΠΎΠΏΠ°Π΄Π°Π½ΠΈΠ΅ Π·Π½Π°ΡΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΠΉ ΡΠ°ΡΡΠΈ Π΄ΠΎΠ·Ρ Π½Π° Π·Π°Π΄Π½ΡΡ ΡΡΠ΅Π½ΠΊΡ Π³Π»ΠΎΡΠΊΠΈ ΠΈ Π² Π²Π΅ΡΡ Π½ΠΈΠ΅ Π΄ΡΡ Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΡΠ΅ ΠΏΡΡΠΈ ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ ΠΏΡΠΈΠ²Π΅ΡΡΠΈ ΠΊ ΡΠ°Π·Π²ΠΈΡΠΈΡ ΠΎΡ ΡΠΈΠΏΠ»ΠΎΡΡΠΈ Π³ΠΎΠ»ΠΎΡΠ° ΠΈ ΡΠ°Π·Π²ΠΈΡΠΈΡ ΠΊΠ°Π½Π΄ΠΈΠ΄ΠΎΠ·Π° (Β«ΠΌΠΎΠ»ΠΎΡΠ½ΠΈΡΠ°Β») ΠΏΠΎΠ»ΠΎΡΡΠΈ ΡΡΠ°, Π²ΡΠ·Π²Π°ΡΡ ΡΠ΅ΡΠ»Π΅ΠΊΡΠΎΡΠ½ΡΠΉ ΠΊΠ°ΡΠ΅Π»Ρ. ΠΡΠΎΠΌΠ΅ ΡΠΎΠ³ΠΎ, Π² Π΄Π°Π»ΡΠ½Π΅ΠΉΡΠ΅ΠΌ ΡΠ° ΡΠ°ΡΡΡ ΠΏΡΠ΅ΠΏΠ°ΡΠ°ΡΠ°, ΠΊΠΎΡΠΎΡΠ°Ρ ΠΎΡΠ΅Π΄Π°Π΅Ρ Π² Π³Π»ΠΎΡΠΊΠ΅, ΠΏΡΠΎΠ³Π»Π°ΡΡΠ²Π°Π΅ΡΡΡ, ΠΈ ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ Π²ΡΠ·Π²Π°ΡΡ ΡΠΈΡΡΠ΅ΠΌΠ½ΠΎΠ΅ Π΄Π΅ΠΉΡΡΠ²ΠΈΠ΅. Π‘ΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅Ρ ΡΠΌΠ΅Π½ΡΡΠ°Π΅Ρ ΠΎΡΠ΅Π΄Π°Π½ΠΈΠ΅ ΠΏΡΠ΅ΠΏΠ°ΡΠ°ΡΠΎΠ² Π² Π³Π»ΠΎΡΠΊΠ΅ ΠΈ Π²Π΅ΡΡ Π½ΠΈΡ Π΄ΡΡ Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΡΡ ΠΏΡΡΡΡ , ΡΠ΅ΠΌ ΡΠ°ΠΌΡΠΌ ΠΏΡΠ΅Π΄ΡΠΏΡΠ΅ΠΆΠ΄Π°Ρ ΡΠ°Π·Π²ΠΈΡΠΈΠ΅ ΠΏΠΎΠ΄ΠΎΠ±Π½ΡΡ ΠΎΡΠ»ΠΎΠΆΠ½Π΅Π½ΠΈΠΉ. ΠΡΠ΅ΠΌ ΠΏΠ°ΡΠΈΠ΅Π½ΡΠ°ΠΌ, ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠΌ ΠΈΠ½Π³Π°Π»ΡΡΠΈΠΎΠ½Π½ΡΠ΅ Π³ΠΎΡΠΌΠΎΠ½Π°Π»ΡΠ½ΡΠ΅ ΠΏΡΠ΅ΠΏΠ°ΡΠ°ΡΡ Π½Π°Π·Π½Π°ΡΠ΅Π½Ρ Π² ΡΠΎΡΠΌΠ΅ Π΄ΠΎΠ·ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΠΎΠΉ Π°ΡΡΠΎΠ·ΠΎΠ»ΠΈ, ΡΠ΅ΠΊΠΎΠΌΠ΅Π½Π΄ΡΠ΅ΡΡΡ ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅Π½ΡΡΡ ΠΈΡ ΡΠ΅ΡΠ΅Π· ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅Ρ.
ΠΠΏΡΠΈΠΌΠ°Π»ΡΠ½ΡΠΉ Π²Π°ΡΠΈΠ°Π½Ρ β Π²Π΄ΡΡ Π°Π½ΠΈΠ΅ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠΉ Π΄ΠΎΠ·Ρ ΠΏΡΠΈ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠΌ ΡΠ°ΡΠΏΡΠ»Π΅Π½ΠΈΠΈ. ΠΡΠ»ΠΈ Π½ΡΠΆΠ½Ρ 2 Π΄ΠΎΠ·Ρ, ΠΏΡΠΎΠ²Π΅Π΄ΠΈΡΠ΅ 2 ΡΠ°Π·Π΄Π΅Π»ΡΠ½ΡΠ΅ ΠΈΠ½Π³Π°Π»ΡΡΠΈΠΈ Ρ Π½Π΅Π±ΠΎΠ»ΡΡΠΈΠΌ ΠΈΠ½ΡΠ΅ΡΠ²Π°Π»ΠΎΠΌ ΠΏΠΎ Π²ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½ΠΈ (ΠΎΠ±ΡΡΠ½ΠΎ ΠΎΠΊΠΎΠ»ΠΎ 30 ΡΠ΅ΠΊΡΠ½Π΄). ΠΠ½Π³Π°Π»ΡΡΠΈΡ Π½Π΅ΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΠΈΡ Π΄ΠΎΠ· ΠΈΠ· ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅ΡΠ° ΠΌΠ΅Π½Π΅Π΅ ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π½Π°, ΡΠ΅ΠΌ ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅Π½Π΅Π½ΠΈΠ΅ ΡΠ΅Ρ ΠΆΠ΅ Π΄ΠΎΠ· ΠΏΠΎ ΠΎΡΠ΄Π΅Π»ΡΠ½ΠΎΡΡΠΈ (ΡΠ°ΠΊΡΡ ΠΌΠ΅ΡΠΎΠ΄ΠΈΠΊΡ ΠΈΠ½ΠΎΠ³Π΄Π° ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΡΡΡ ΠΏΡΠΈ ΡΡΠΆΠ΅Π»ΡΡ ΠΏΡΠΈΡΡΡΠΏΠ°Ρ ). Π‘ Π΄ΡΡΠ³ΠΎΠΉ ΡΡΠΎΡΠΎΠ½Ρ, ΠΎΡΠ΅Π½Ρ ΠΌΠ°Π»Π΅Π½ΡΠΊΠΈΠ΅ Π΄Π΅ΡΠΈ Π½Π΅ Π² ΡΠΎΡΡΠΎΡΠ½ΠΈΠΈ Π²Π΄ΠΎΡ Π½ΡΡΡ Π²Π΅ΡΡ ΠΎΠ±ΡΠ΅ΠΌ ΠΈΠ· ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅ΡΠ° Π·Π° ΠΎΠ΄ΠΈΠ½ Π²Π΄ΠΎΡ . Π‘ΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅ΡΡ Π΄Π»Ρ Π½ΠΈΡ ΠΎΠ±ΡΡΠ½ΠΎ ΠΈΠΌΠ΅ΡΡ ΠΊΠ»Π°ΠΏΠ°Π½Ρ Π²Π΄ΠΎΡ Π° ΠΈ Π²ΡΠ΄ΠΎΡ Π°. ΠΠ°ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅Ρ, Π΄Π»Ρ ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅ΡΠ° ΠΠ΅Π±ΠΈΡ Π°Π»Π΅ΡΠ° ΠΎΠ³ΠΎΠ²ΠΎΡΠ΅Π½ΠΎ, ΡΡΠΎ ΡΠ΅Π±Π΅Π½ΠΊΡ Π²Π΅ΡΠΎΠΌ 10 ΠΊΠ³ ΡΡΠ΅Π±ΡΠ΅ΡΡΡ ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅ΡΠ½ΠΎ 5 Π²Π΄ΠΎΡ ΠΎΠ² Π½Π° ΠΎΠ΄Π½Ρ Π΄ΠΎΠ·Ρ ΠΏΡΠ΅ΠΏΠ°ΡΠ°ΡΠ°. ΠΡΠΎΠΌΠ΅ ΡΠΎΠ³ΠΎ, Π½Π΅ Π²ΡΠ΅Π³Π΄Π° ΠΏΠ°ΡΠΈΠ΅Π½Ρ ΠΌΠΎΠΆΠ΅Ρ ΡΠ΄Π΅Π»Π°ΡΡ Π΄ΠΎΡΡΠ°ΡΠΎΡΠ½ΠΎ Π³Π»ΡΠ±ΠΎΠΊΠΈΠΉ Π²Π΄ΠΎΡ , Π° Π·Π° ΡΠΎ Π²ΡΠ΅ΠΌΡ, ΠΊΠΎΡΠΎΡΠΎΠ΅ Π°ΡΡΠΎΠ·ΠΎΠ»Ρ Π² ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅ΡΠ΅ ΡΠΎΡ ΡΠ°Π½ΡΠ΅ΡΡΡ Π² Π½Π΅ΠΈΠ·ΠΌΠ΅Π½Π΅Π½Π½ΠΎΠΌ ΡΠΎΡΡΠΎΡΠ½ΠΈΠΈ (ΠΎΠΊΠΎΠ»ΠΎ 30 ΡΠ΅ΠΊΡΠ½Π΄) ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ ΡΠ΄Π΅Π»Π°ΡΡ Π½Π΅ ΠΎΠ΄ΠΈΠ½, Π° Π½Π΅ΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ Π²Π΄ΠΎΡ ΠΎΠ². ΠΊΠ°Π·ΠΈΠ½ΠΎ Π΄ΠΆΠΎΠΊΠ΅Ρ
ΠΡΠ°Π²ΠΈΠ»Π° ΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΡ ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅ΡΠΎΠΌ
* Π§ΡΠΎΠ±Ρ ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅Ρ Π±ΡΠ» ΡΡΡΠ΅ΠΊΡΠΈΠ²Π΅Π½, Π½Π°Π΄ΠΎ Π΅Π³ΠΎ ΠΈΡΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°ΡΡ ΠΏΡΠ°Π²ΠΈΠ»ΡΠ½ΠΎ.
* ΠΠ΅ΡΠ΅Π΄ ΡΠ΅ΠΌ, ΠΊΠ°ΠΊ Π²ΡΡΠ°Π²ΠΈΡΡ ΠΈΠ½Π³Π°Π»ΡΡΠΎΡ Π² ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅Ρ, ΡΠ»Π΅Π΄ΡΠ΅Ρ ΡΠ½ΡΡΡ Π·Π°ΡΠΈΡΠ½ΡΠΉ ΠΊΠΎΠ»ΠΏΠ°ΡΠΎΠΊ Ρ ΠΈΠ½Π³Π°Π»ΡΡΠΎΡΠ° (ΠΈ ΡΠΎ ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅ΡΠ°, Π΅ΡΠ»ΠΈ ΠΎΠ½ ΠΈΠΌΠ΅Π΅ΡΡΡ; ΠΏΡΠΈΡΠΎΠ΅Π΄ΠΈΠ½ΠΈΡΡ ΠΌΠ°ΡΠΊΡ, Π΅ΡΠ»ΠΈ Π½Π΅ΠΎΠ±Ρ
ΠΎΠ΄ΠΈΠΌΠΎ).
* ΠΠ°Π»Π»ΠΎΠ½ΡΠΈΠΊ ΠΈΠ½Π³Π°Π»ΡΡΠΎΡΠ° Π΄ΠΎΠ»ΠΆΠ΅Π½ Π±ΡΡΡ ΠΎΠ±ΡΠ°ΡΠ΅Π½ Π΄Π½ΠΎΠΌ ΠΊΠ²Π΅ΡΡ
Ρ, Π° ΠΌΡΠ½Π΄ΡΡΡΠΊΠΎΠΌ Π²Π½ΠΈΠ· (Π½Π΅ Π½Π°ΠΎΠ±ΠΎΡΠΎΡ!).
* ΠΡΡΡΡΡ
ΠΈΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ Π°ΡΡΠΎΠ·ΠΎΠ»ΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ Π±Π°Π»Π»ΠΎΠ½ΡΠΈΠΊΠ° Π² Π±ΠΎΠ»ΡΡΠΈΠ½ΡΡΠ²Π΅ ΡΠ»ΡΡΠ°Π΅Π² ΡΠ΅ΠΊΠΎΠΌΠ΅Π½Π΄ΡΠ΅ΡΡΡ ΠΏΡΠΎΠΈΠ·Π²ΠΎΠ΄ΠΈΡΡ ΡΠΆΠ΅ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅ Π΅Π³ΠΎ ΡΠΎΠ΅Π΄ΠΈΠ½Π΅Π½ΠΈΡ ΡΠΎ ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅ΡΠΎΠΌ (Π²ΠΌΠ΅ΡΡΠ΅ ΡΠΎ ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅ΡΠΎΠΌ).
* ΠΠ΅ΡΠ΅Π΄ ΠΈΠ½Π³Π°Π»ΡΡΠΈΠ΅ΠΉ ΡΠ»Π΅Π΄ΡΠ΅Ρ ΡΠ΄Π΅Π»Π°ΡΡ Π³Π»ΡΠ±ΠΎΠΊΠΈΠΉ Π²ΡΠ΄ΠΎΡ
.
* ΠΡΠ±Ρ Π΄ΠΎΠ»ΠΆΠ½Ρ ΠΏΠ»ΠΎΡΠ½ΠΎ ΠΎΡ
Π²Π°ΡΡΠ²Π°ΡΡ ΠΌΡΠ½Π΄ΡΡΡΠΊ ΠΈΠ½Π³Π°Π»ΡΡΠΎΡΠ°, Π·ΡΠ±Ρ Π½Π΅ Π΄ΠΎΠ»ΠΆΠ½Ρ Π±ΡΡΡ ΡΡΠΈΡΠ½ΡΡΡ, ΡΡΠΎΠ±Ρ Π½Π΅ ΠΏΡΠ΅ΠΏΡΡΡΡΠ²ΠΎΠ²Π°ΡΡ ΠΏΠΎΠΏΠ°Π΄Π°Π½ΠΈΡ Π°ΡΡΠΎΠ·ΠΎΠ»ΠΈ.
* ΠΠ΄ΠΎΡ
ΠΈΠ· ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅ΡΠ° Π΄ΠΎΠ»ΠΆΠ΅Π½ ΠΏΡΠΎΠ²ΠΎΠ΄ΠΈΡΡΡΡ ΠΊΠ°ΠΊ ΠΌΠΎΠΆΠ½ΠΎ Π±ΡΡΡΡΠ΅Π΅ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅ ΡΠ°ΡΠΏΡΠ»Π΅Π½ΠΈΡ Π°ΡΡΠΎΠ·ΠΎΠ»ΠΈ (ΡΠ΅ΡΠ΅Π· 1-2, Π΄ΠΎ 5 ΡΠ΅ΠΊΡΠ½Π΄). ΠΠ΄ΠΎΡ
Π΄ΠΎΠ»ΠΆΠ΅Π½ Π±ΡΡΡ ΠΏΠΎΠ»Π½ΡΠΌ, Π³Π»ΡΠ±ΠΎΠΊΠΈΠΌ ΠΈ Π½Π΅ ΡΠ»ΠΈΡΠΊΠΎΠΌ Π±ΡΡΡΡΡΠΌ. Π ΡΡΠ΄Π΅ ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅ΡΠΎΠ² ΡΠ΅ΠΊΠΎΠΌΠ΅Π½Π΄ΡΠ΅ΡΡΡ ΡΠ΄Π΅Π»Π°ΡΡ Π½Π΅ΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ Π²Π΄ΠΎΡ
ΠΎΠ² Π½Π° ΠΎΠ΄Π½Ρ Π΄ΠΎΠ·Ρ ΠΏΡΠ΅ΠΏΠ°ΡΠ°ΡΠ°.
* ΠΠΎΡΠ»Π΅ ΠΈΠ½Π³Π°Π»ΡΡΠΈΠΈ ΡΠ»Π΅Π΄ΡΠ΅Ρ Π·Π°Π΄Π΅ΡΠΆΠ°ΡΡ Π΄ΡΡ
Π°Π½ΠΈΠ΅ Π½Π° 5-10 ΡΠ΅ΠΊΡΠ½Π΄, ΠΏΠΎΡΠΎΠΌ ΡΠ΄Π΅Π»Π°ΡΡ ΡΠΏΠΎΠΊΠΎΠΉΠ½ΡΠΉ Π²ΡΠ΄ΠΎΡ
.
* ΠΡΠ»ΠΈ Π½Π°Π·Π½Π°ΡΠ΅Π½Π° ΠΈΠ½Π³Π°Π»ΡΡΠΈΡ Π½Π΅ΡΠΊΠΎΠ»ΡΠΊΠΈΡ
Π΄ΠΎΠ·, ΠΈΡ
ΡΠ»Π΅Π΄ΡΠ΅Ρ ΠΈΠ½Π³Π°Π»ΠΈΡΠΎΠ²Π°ΡΡ ΠΏΠΎΡΠ»Π΅Π΄ΠΎΠ²Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎ Ρ ΠΏΡΠΎΠΌΠ΅ΠΆΡΡΠΊΠΎΠΌ ΠΎΠΊΠΎΠ»ΠΎ 30 ΡΠ΅ΠΊΡΠ½Π΄, Π° Π½Π΅ ΠΎΠ΄Π½ΠΎΠ²ΡΠ΅ΠΌΠ΅Π½Π½ΠΎ.
* ΠΠΎΡΠ»Π΅ ΠΈΠ½Π³Π°Π»ΡΡΠΈΠΈ Π³ΠΎΡΠΌΠΎΠ½Π°Π»ΡΠ½ΡΡ
ΠΏΡΠ΅ΠΏΠ°ΡΠ°ΡΠΎΠ² ΡΠ»Π΅Π΄ΡΠ΅Ρ ΠΏΡΠΎΠΏΠΎΠ»ΠΎΡΠΊΠ°ΡΡ ΡΠΎΡ (Π° ΠΏΡΠΈ ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅Π½Π΅Π½ΠΈΠΈ ΠΌΠ°ΡΠΊΠΈ β Π΅ΡΠ΅ ΠΈ ΡΠΌΡΡΡ Π»ΠΈΡΠΎ).
* Π‘ΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅Ρ ΡΠ»Π΅Π΄ΡΠ΅Ρ Π²ΠΎΠ²ΡΠ΅ΠΌΡ ΠΌΡΡΡ ΠΈ ΠΌΠ΅Π½ΡΡΡ Π½Π° Π½ΠΎΠ²ΡΠΉ ΠΏΡΠΈ ΠΏΠΎΠ²ΡΠ΅ΠΆΠ΄Π΅Π½ΠΈΠΈ ΠΈΠ»ΠΈ ΡΠ΅ΡΠ΅Π· ΡΠΊΠ°Π·Π°Π½Π½ΡΠ΅ Π² ΠΈΠ½ΡΡΡΡΠΊΡΠΈΠΈ ΡΡΠΎΠΊΠΈ.
* ΠΠ±ΡΠ°ΡΠ°ΠΉΡΠ΅ Π²Π½ΠΈΠΌΠ°Π½ΠΈΠ΅ Π½Π° ΠΈΠ½ΡΡΡΡΠΊΡΠΈΠΈ ΠΏΠΎ ΠΎΡΠΈΡΡΠΊΠ΅: Π±ΠΎΠ»ΡΡΠΈΠ½ΡΡΠ²ΠΎ ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅ΡΠΎΠ² Π½Π΅ Π΄ΠΎΠΏΡΡΠΊΠ°ΡΡ ΠΊΠΈΠΏΡΡΠ΅Π½ΠΈΡ ΠΈ ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅Π½Π΅Π½ΠΈΡ Π°Π³ΡΠ΅ΡΡΠΈΠ²Π½ΡΡ
ΡΡΠ΅Π΄, ΡΠ°ΡΡΠΎ ΠΈΡ
Π½Π΅ ΡΠ΅ΠΊΠΎΠΌΠ΅Π½Π΄ΡΠ΅ΡΡΡ Π²ΡΡΠΈΡΠ°ΡΡ ΡΠΊΠ°Π½ΡΡ. ΠΡΠΎΠ±ΡΡ ΠΎΡΡΠΎΡΠΎΠΆΠ½ΠΎΡΡΡ ΡΠ»Π΅Π΄ΡΠ΅Ρ ΡΠΎΠ±Π»ΡΠ΄Π°ΡΡ Π² ΠΎΡΠ½ΠΎΡΠ΅Π½ΠΈΠΈ ΠΊΠ»Π°ΠΏΠ°Π½ΠΎΠ².
ΠΠ°ΠΊ Π²ΡΠ±ΡΠ°ΡΡ ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅Ρ?
Π‘ΠΎΠ΅Π΄ΠΈΠ½ΠΈΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎΠ΅ ΠΎΡΠ²Π΅ΡΡΡΠΈΠ΅ ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅ΡΠ° (ΠΌΠ΅ΡΡΠΎ Π΄Π»Ρ ΠΏΡΠΈΡΠΎΠ΅Π΄ΠΈΠ½Π΅Π½ΠΈΡ Π±Π°Π»Π»ΠΎΠ½ΡΠΈΠΊΠ° Ρ Π΄ΠΎΠ·ΠΈΡΠΎΠ²Π°Π½Π½ΡΠΌ Π°ΡΡΠΎΠ·ΠΎΠ»Π΅ΠΌ) Π΄ΠΎΠ»ΠΆΠ½ΠΎ ΡΠΎΠΎΡΠ²Π΅ΡΡΡΠ²ΠΎΠ²Π°ΡΡ ΡΠ°Π·ΠΌΠ΅ΡΠ°ΠΌ ΠΈ ΡΠΎΡΠΌΠ΅ ΠΌΡΠ½Π΄ΡΡΡΠΊΠ° Π±Π°Π»Π»ΠΎΠ½ΡΠΈΠΊΠ° ΠΈΠ»ΠΈ Π±ΡΡΡ ΡΠ½ΠΈΠ²Π΅ΡΡΠ°Π»ΡΠ½ΡΠΌ. Π ΡΠ΄ ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅ΡΠΎΠ² ΡΠΎΠ²ΠΌΠ΅ΡΡΠΈΠΌΡ ΡΠΎΠ»ΡΠΊΠΎ Ρ Π°ΡΡΠΎΠ·ΠΎΠ»ΡΠ½ΡΠΌΠΈ ΠΈΠ½Π³Π°Π»ΡΡΠΎΡΠ°ΠΌΠΈ ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅Π»Π΅Π½Π½ΡΡ ΡΠΈΡΠΌ. Π‘ΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅Ρ Π΄ΠΎΠ»ΠΆΠ΅Π½ Π±ΡΡΡ Π΄ΠΎΡΡΠ°ΡΠΎΡΠ½ΠΎΠ³ΠΎ ΡΠ°Π·ΠΌΠ΅ΡΠ°, ΠΈΠ»ΠΈ ΠΎΠ±Π»Π°Π΄Π°ΡΡ Π°ΡΡΠΎΠ΄ΠΈΠ½Π°ΠΌΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΈ Π²ΡΠ²Π΅ΡΠ΅Π½Π½ΠΎΠΉ ΡΠΎΡΠΌΠΎΠΉ. Π£ Π΄Π΅ΡΠ΅ΠΉ ΡΠ΅ΠΊΠΎΠΌΠ΅Π½Π΄ΡΠ΅ΡΡΡ ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅Π½ΡΡΡ ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅ΡΡ, ΡΠ½Π°Π±ΠΆΠ΅Π½Π½ΡΠ΅ ΠΊΠ»Π°ΠΏΠ°Π½Π°ΠΌΠΈ, ΠΏΡΠΈ ΡΡΠΎΠΌ Ρ ΠΌΠ°Π»Π΅Π½ΡΠΊΠΈΡ Π΄Π΅ΡΠ΅ΠΉ ΠΆΠ΅Π»Π°ΡΠ΅Π»ΡΠ½ΠΎ Π½Π°Π»ΠΈΡΠΈΠ΅ ΠΊΠ»Π°ΠΏΠ°Π½ΠΎΠ² ΠΊΠ°ΠΊ Π²Π΄ΠΎΡ Π°, ΡΠ°ΠΊ ΠΈ Π²ΡΠ΄ΠΎΡ Π°. ΠΠ΅ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠ΅ ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅ΡΡ ΡΠ½ΠΈΠ²Π΅ΡΡΠ°Π»ΡΠ½Ρ, Π° Π½Π΅ΠΊΠΎΡΠΎΡΡΠ΅ ΠΏΡΠ΅Π΄Π½Π°Π·Π½Π°ΡΠ΅Π½Ρ Π΄Π»Ρ ΠΎΠΏΡΠ΅Π΄Π΅-Π»Π΅Π½Π½ΠΎΠ³ΠΎ Π²ΠΎΠ·ΡΠ°ΡΡΠ° (Π½Π°ΠΏΡΠΈΠΌΠ΅Ρ, Ρ Π΄Π΅ΡΠ΅ΠΉ Π΄ΠΎ 5 Π»Π΅Ρ). Π‘ΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅Ρ Π΄ΠΎΠ»ΠΆΠ΅Π½ Π±ΡΡΡ ΠΈΠ·Π³ΠΎΡΠΎΠ²Π»Π΅Π½ ΠΈΠ· Π³ΠΈΠΏΠΎΠ°Π»Π»Π΅ΡΠ³Π΅Π½Π½ΡΡ ΠΌΠ°ΡΠ΅ΡΠΈΠ°Π»ΠΎΠ². ΠΠ°Π»ΠΈΡΠΈΠ΅ Π°Π½ΡΠΈΡΡΠ°ΡΠΈΡΠ΅ΡΠΊΠΎΠ³ΠΎ ΠΏΠΎΠΊΡΡΡΠΈΡ ΡΠ»ΡΡΡΠ°Π΅Ρ Ρ Π°ΡΠ°ΠΊΡΠ΅ΡΠΈΡΡΠΈΠΊΠΈ ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅ΡΠ°. ΠΡΠ»ΠΈ ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅Ρ ΡΠ°Π·Π±ΠΈΡΠ°Π΅ΡΡΡ, ΡΠΎ Π·Π° Π½ΠΈΠΌ Π»Π΅Π³ΡΠ΅ ΡΡ Π°ΠΆΠΈΠ²Π°ΡΡ. ΠΠ΅ΡΡΠΌ ΠΏΠ΅ΡΠ²ΡΡ Π»Π΅Ρ ΠΆΠΈΠ·Π½ΠΈ Π½Π΅ΠΎΠ±Ρ ΠΎΠ΄ΠΈΠΌ ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅Ρ Ρ ΠΌΠ°ΡΠΊΠΎΠΉ. ΠΠ΅ΡΡΠΌ Π±ΠΎΠ»Π΅Π΅ ΡΡΠ°ΡΡΠ΅Π³ΠΎ Π²ΠΎΠ·ΡΠ°ΡΡΠ°, ΠΏΠΎΠΆΠΈΠ»ΡΠΌ, ΠΎΡΠ»Π°Π±Π»Π΅Π½Π½ΡΠΌ Π±ΠΎΠ»ΡΠ½ΡΡ , ΡΠ΅ΠΌ, Ρ ΠΊΠΎΠ³ΠΎ Π±ΡΠ²Π°ΡΡ ΡΡΠΆΠ΅Π»ΡΠ΅ ΠΏΡΠΈΡΡΡΠΏΡ, Π»ΡΡΡΠ΅ ΠΏΡΠΈΠΎΠ±ΡΠ΅ΡΡΠΈ ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅Ρ ΡΠΎ ΡΡΠ΅ΠΌΠ½ΠΎΠΉ ΠΌΠ°ΡΠΊΠΎΠΉ, Ρ.ΠΊ. Π΄Π»Ρ Π½ΠΈΡ Π²ΠΎΠ·ΠΌΠΎΠΆΠ΅Π½ ΠΏΠ΅ΡΠ΅Ρ ΠΎΠ΄ Π½Π° ΠΏΠΎΠ»ΡΠ·ΠΎΠ²Π°Π½ΠΈΠ΅ ΡΠΏΠ΅ΠΉΡΠ΅ΡΠΎΠΌ Π±Π΅Π· ΠΌΠ°ΡΠΊΠΈ.