След сифилиса в крови
Самым распространенным венерическим заболеванием является сифилис.
Заражение в подавляющем большинстве случаев происходит при половом контакте (вагинальном, оральном, анальном).
Реже контактно-бытовым путем и при переливании крови.
Возбудитель инфекции также передается внутриутробно через плаценту матери плоду.
Инкубационный период трепонемы составляет 20-30 дней от момента заражения.
Первым симптомом заболевания является возникновение на слизистой половых органов специфического язвенно-эрозивного образования – твердого шанкра.
Этот патологический элемент всегда локализуется в месте проникновения в организм возбудителя.
Т.е. в области инфекционных ворот.
Твердый шанкр выглядит в виде небольшой округлой язвы синевато-красного цвета с гладким блестящим дном и неровными краями.
Образование безболезненное и плотное на ощупь, не чешется и не вызывает у больного никакого дискомфорта.
Паховые при локализации язвы на гениталиях, шейные и подчелюстные при оральном заражении.
Через некоторое время шанкр самопроизвольно, без применения каких-либо лечебных мер исчезает.
Через 1,5-2 месяца наступает вторичный период болезни, он знаменуется появлением на теле больных сифилитической сыпи в виде папул красного цвета.
При этом сыпь не чешется и не болит.
При отсутствии лечения во вторичном периоде происходит поражение внутренних органов и систем.
При длительном персистирующем течении инфекции эти изменения тяжелые и необратимые.
Сифилис: особенности диагностики
Диагностика сифилиса осуществляется венерологом.
На основании клинической картины болезни, данных визуального осмотра больного, лабораторных исследований соскобов с сифилитических высыпаний, урогенитального соскоба, крови и т.д.
Основополагающим методом лабораторной диагностики сифилиса является иммунологическое исследование.
Серологические тесты на сифилис делят не специфические и неспецифические.
Неспецифические тесты позволяют выявлять в крови больных антитела к бледной трепонеме.
Следует отметить, что антитела к возбудителю сифилиса обнаруживают, в том числе, в организме уже переболевших в прошлом людей – следы сифилиса в их крови остаются на всю жизнь.
Этот факт всегда учитывается при исследованиях, которые дают ложноположительные результаты.
О том как обнаруживается
след сифилиса в крови
рассказывает подполковник
медицинской службы, врач
Ленкин Сергей Геннадьевич
Содержание данной статьи проверено и подтверждено на соответствие медицинским
стандартам врачем дерматовенерологом, урологом, к.м.н.
Ленкиным Сергеем Геннадьевичем
| Наименование | Срок | Цена |
|---|---|---|
| Прием венеролога | 900.00 руб. | |
| Микрореакция на сифилис качественно (RPR) | 1 д. | 500.00 руб. |
Возможно ли убрать следы сифилиса
Иногда люди, перенесшие инфекцию в прошлом, интересуются, как убрать следы сифилиса из крови.
Однако это сделать невозможно: следы в виде антител останутся в организме на всю жизнь.
И будут выявляться во время анализов даже через много лет после переболевания сифилисом.
В тех случаях, когда анализ на сифилис дает положительный результат, для исключения сомнений и подтверждения диагноза прибегают к помощи специфических тестов.
Они позволяют определить наличие первичного инфицирования, стадию развития заболевания, интенсивность инфекционного процесса.
Это возможно благодаря определению класса обнаруженных иммуноглобулинов (A, M и G), а также их титра.
Для окончательной верификации диагноза может использоваться ПЦР-исследование.
Оно позволяет обнаружить в биологическом материале геном бледной трепонемы.
Лечение сифилиса осуществляют комплексно, главным образом, с помощью системной антибиотикотерапии.
При обнаружении сифилиса у пациента, медикаментозное лечение должно быть проведено у всех его половых партнером.
Во время курса лечения категорически запрещен прием алкоголя и половые отношения.
РПГА: след сифилиса
При помощи этого исследования проверяют количество возбудителя в сыворотки крови больного.
Таким образом проверяют кровь на следы сифилиса.
Данный метод является чувствительным и достаточно точным.
После того как было пройдено лечение, методика исследования может давать слабоположительный ответ.
Такой результат можно наблюдать на протяжении многих лет после выздоровления.
В качестве исключения, анализ методом РПГА, может давать отрицательный ответ при перенесенном заболевании.
Обычно это происходит в том случае, если проводилось своевременное лечение болезни на ранней стадии.
Важно! Реакция пассивной гемагглютинации не является информативной при исследованиях раннего или позднего сифилиса.
Данный метод не применяется в качестве оценки эффективности терапии.
Наличие антител можно обнаружить при наличии системных заболеваний, онкологии.
При ложноположительном ответе, результат может наблюдаться длительный период времени и после этого бесследно исчезать.
Чтобы поставить диагноз и определить остаточное количество спирохет, следует провести дополнительные лабораторные анализы.
Подтвердить следы сифилиса помогут дополнительные методы диагностики.
В этом случае, врач проведет дифференциальную диагностику, чтобы исключить возможность развития дополнительной инфекции.
Предупредить рецидив заболевания поможет обследование партнера на наличие возбудителя сифилиса.
РИБТ и РИФ: следы сифилиса
Реакция иммобилизации бледных трепонем и иммунофлюоресценции применяется для изучения крови человека на наличие сифилиса.
Этот вид теста считается трепонемным.
При помощи методик заболевание выявляется и на начальных стадиях развития.
Кроме этого, их применяют для исследования латентной формы болезни, когда признаки сифилиса не проявляются.
Как проводится исследование?
Данные методы анализа выполняются путем определения антител в крови человека.
Используется венозная кровь человека, в сыворотку добавляют специальные реагенты.
В результате выработки антител, происходит реакция, при которой бактерии склеиваются.
Исследование оценивается путем подсчета количества комплексов.
Следы сифилиса при диагностике РИБТ и РИФ методами можно определить на разных стадиях заболевания.
Иногда они дают слабоположительный ответ.
Если отмечается прогрессирование инфекции, количество антител будет возрастать.
Часто, врач назначает одновременно несколько диагностических исследований.
Это необходимо для точной диагностики и контроля лечения.
Иммуноблот: след сифилиса
Относительно новый вид исследования.
Считается одним из достоверных методов при выявлении бледной трепонемы.
При помощи иммуноблота, определятся уровень антител.
Иммунная система в ответ на наличие возбудителя начинает выделять антитела М и иммуноглобулин сифилиса G.
Позволяет выявить ответ иммунной системы организма на заболевание до и после прохождения лечения.
Метод не применяют в качестве контрольных анализов после лечения.
Иммуноблот – трепонемный тест, для использования этого метода анализа применяют специфические антигены возбудителя сифилиса.
Как интерпретируют результат?
Положительный результат дает две окрашенные полосы.
По их интенсивности судят о развитии болезни.
Четко окрашенные две полоски говорят о положительном результате.
Если полосы отсутствуют, результат можно интерпретировать как отрицательный.
В том случае если ответ получился слабоположительным, необходимо повторить исследование не ранее чем через неделю.
Возможно, что человек, в недавнем времени, переболел сифилисом.
Важно! Диагноз ставит врач венеролог. Не стоит делать самостоятельные выводы по результатам одного анализа.
Обычно рекомендуется сдать анализы на М антитела к другим белкам трепонемы.
Иммуноблот тест, при необходимости, позволяет определить антитела M и G отдельно друг от друга.
Если болезнь имеет скрытое течение, то обнаружить IgM невозможно.
IgG появляется к концу течения болезни, и сохраняется в организме длительный период времени.
Если антитела в крови больного появились повторно, это может свидетельствовать о рецидиве заболевания или не эффективности антибактериального лечения.
Особая подготовка для проведения анализа методом иммуноблот не требуется.
Забор крови должен осуществляться натощак.
Перед исследованием следует отменить прием алкогольных и табачных изделий.
Проводится анализ после отмены лекарственных препаратов.
Следы после сифилиса
Как правило, человек переболевший сифилисом, возвращается в нормальную повседневную жизнь.
Он продолжает жить как люди, которые никогда не болели сифилисом.
Но все же, есть определенные ограничения.
После того как больной выписан из стационара, следует посещать врача венеролога.
После успешно пройденного лечения определенный период времени пациент находится под наблюдением в кожно-венерологическом диспансере.
Человек считается здоровым, если было успешно пройден курс медикаментозной терапии.
Подтверждают выздоровление при помощи:
Но, несмотря на это, остается след сифилиса в крови человека.
Почему тест на сифилис положительный после лечения?
Это является результатом того что кровь не очищается от антител, даже после выздоровления.
Такой результат называется ложноположительным, он может сопровождать человека на протяжении всей жизни.
Как убрать следы сифилиса из крови?
Чтобы очистить кровь, следует выяснить причину такой реакции.
Наличие положительной реакции может быть признаком сифилиса, которые не вылечен до конца.
На состояние крови влияют следующие факторы:
Если трепонема остается в организме в небольшом количестве после лечения, обычно она не способна размножаться.
При таком состоянии возбудителя в организме, он не способен наносить вреда.
Но не стоит игнорировать этот процесс.
При наличии малейших сомнений, проконсультируйтесь с врачом.
Возможно, ли заражение сифилисом при половом контакте, если остались следы сифилиса в крови?
Если произойдет контакт с больным человеком, возможно повторное заражение сифилисом.
Иммунитета к инфекции не формируется.
Обратите внимание! При обнаружении следов сифилиса в крови, следует обязательно выяснить причину и при необходимости повторить лечение.
После того как будет пройдено лечение, видимые признаки исчезают и человек может вернуться к полноценной жизни.
Для контроля приводится периодическое обследование.
У некоторых людей, которые переболели сифилисом, может отмечаться положительный результат.
Убрать следы трепонем из крови человека невозможно.
Иногда, иммуноглобулины исчезают сами.
Способ для очистки крови от остаточных антител не найден.
Когда уйдут следы сифилиса после лечения?
Процесс очищения может занять несколько лет, а в некоторых случаях и всю жизнь.
Для контроля состояния организма после лечения следует проводить не один, а несколько контрольных тестов.
Только комплексное исследование поможет определить состояние здоровья человека.
Для этого применяют специфические тесты.
Они позволяют определить класс иммуноглобулина.
Носителям чаще всего назначается исследование методом ПЦР, количественным способом.
Такое исследование поможет определить наличие или отсутствие ДНК трепонемы.
При необходимости получить консультацию по поводу сифилиса обращайтесь к автору этой статьи – венерологу в Москве с 15 летним опытом работы.
Сифилис RPR, антикардиолипиновый тест
Описание
Сифилис (люэс) — инфекционное заболевание, вызываемое бледной трепонемой (Treponema pallidum), передающееся в основном половым путем, склонное к хроническому течению и поражающее большинство органов и систем организма.
RPR — неспецифический скрининговый тест (модификация RW), выявляющий иммуноглобулины класса IgG и IgM к фосфолипидам, выделяющимся из повреждённых клеток пациента больного сифилисом.
Тест RPR рекомендован приказом МЗ РФ для первичного скрининга и наблюдения за ходом терапии сифилиса.
Антифосфолипидные антитела
Антифосфолипидные антитела, выявляемые RPR, находят у 70–80% пациентов с первичным сифилисом и почти у 100% пациентов с вторичным и ранним латентным сифилисом. Чаще всего положительная RPR-реакция наблюдается через 3–5 недель после инфицирования или на 7–10 день после появления первичного шанкра. В 90–98% случаев после лечения сифилиса результат RPR-теста становится отрицательным.
Тест RPR неспецифический, поэтому возможно возникновение ложноположительных реакций. Антифосфолипидные антитела появляются не только вследствие сифилиса, но и в ответ на развитие нетрепонемных заболеваний острой или хронической природы, при которых наблюдается повреждение тканей (например, при аутоиммунных заболеваниях).
При получении позитивного RPR-теста, пациент в обязательном порядке должен пройти обследование у венеролога с повторным исследованием крови с помощью специфического трепонемного теста на диагностику сифилиса Трепонема паллидум.
Изредка RPR может дать ложноотрицательный результат (это обусловлено сверхвысоким титром антифосфолипидных антител), эта ситуация исключается при одновременном назначении RPR и диагностики сифилиса Т. pallidum. Совместное проведение тестов RPR и ИФА-теста IgG/IgM представляет лучший вариант скринингового исследования для обнаружения или исключения сифилиса на всех стадиях.
Интерпретация результатов
Референсные значения: отрицательно.
Данная страница не существует!
Услуги инфекционной клиники
Диагностика, профилактика и лечение
Фиброэластометрия и УЗ-диагностика молочных желез, щитовидной железы, мошонки, брюшной полости
Биохимия. Анализ крови: общий, клинический. Анализы на витамины, микроэлементы и электролиты. Анализ на ВИЧ-инфекцию, вирусные гепатиты, бактерии, грибки и паразиты
Максимально точное определение выраженности фиброза печени неинвазивным методом при помощи аппарата FibroScan 502 TOUCH
Гинеколог в H-Сlinic решает широчайший спектр задач в области женского здоровья. Это специалист, которому вы можете полностью доверять
Дерматовенерология в H-Сlinic — это самые современные и эффективные алгоритмы диагностики и лечения заболеваний, передающихся половым путем, грибковых и вирусных поражений, а также удаление доброкачественных невусов, бородавок, кондилом и папиллом
Возможности вакцинопрофилактики гораздо шире Национального календаря прививок. H-Clinic предлагает разработку плана вакцинации и современные высококачественные вакцины в наличии
Терапевт в H-Сlinic эффективно решает задачи по лечению заболеваний, которые зачастую могут становиться большой проблемой при наличии хронического инфекционного заболевания
Врач-кардиолог H-Сlinic проведет комплексную диагностику сердечно-сосудистой системы и при необходимости назначит эффективное терапию. Сердечно-сосудистые проблемы при инфекционных заболеваниях, требуют специфичных подходов, которые мы в состоянии обеспечить
Наша цель — новое качество вашей жизни. Мы используем современные диагностические алгоритмы и строго следуем наиболее эффективным протоколам лечения.
Общая терапия, Инфекционные заболевания, Гастроэнтерология, Дерматовенерология, Гинекология, Вакцинация, УЗИ и фиброэластометрия, Кардиология, Неврология
Биохимия, Общий/клинический анализ крови, Витамины и микроэлементы/электролиты крови, ВИЧ-инфекция, Вирусные гепатиты, Другие инфекции, бактерии, грибки и паразиты, Комплексы и пакеты анализов со скидкой
В наличии и под заказ качественные бюджетные решения и препараты лидеров рынка лечения инфекционных болезней. Аптека H-Clinic готова гибко реагировать на запросы наших клиентов. Мы поможем с оперативным поиском препаратов, которые обычно отсутствуют в сетях.
Иммунологические методы исследования в лабораторной практике
Преимущества иммунологического метода исследования.
Серологические реакции различаются по способности выявлять отдельные классы антител. Реакция агглютинации, например, хорошо выявляет lgM-антитела, но менее чувствительна для определения lgG-антител. Реакции связывания комплемента и гемолиза, которые требуют участия комплемента, не выявляют антитела, не присоединяющие комплемент, например lgA-антитела и lgE-антитела. В реакции нейтрализации вирусов участвуют лишь антитела, направленные против антигенных детерминант поверхности вириона, связанных с патогенностью. Чувствительность иммунулогических методов превосходит все другие методы исследования антигенов и антител, в частности радиоиммунный и иммуноферментный анализы позволяют улавливать присутствие белка в количествах, измеряемых в нанограммах и даже в пикограммах.
С помощью предложенного способа определяют группу и проверяют безопасность крови (гепатит В и ВИЧ-инфекция). При трансплантации тканей и органов, иммунологический метод позволяет определять совместимость тканей и тестировать методы подавления несовместимости. В судебной медицине используют реакцию Кастеллани для определения видовой специфичности белка и реакцию агглютинации для определения группы крови.
Иммунологические методы широко применяют в лабораторной диагностике инфекционных болезней. Этиологию заболевания устанавливают также на основании прироста антител к возбудителю в сыворотке крови реконвалесцента по сравнению с пробой, взятой в первые дни болезни. На основе исследования изучают иммунитет населения по отношению к массовым инфекциям, например к гриппу, а также оценивают эффективность профилактических прививок.
Развитию иммунологических методов способствовало создание моноклональных антител, продуцируемых гибридомой, полученной в результате слияния иммунокомпетентной клетки В-лимфоцита и клетки миеломы мышей. Моноклональные антитела несут только одну химически однородную популяцию антител, комплементарную специфической детерминанте антигена, что позволяет осуществлять тонкую дифференциацию белков. Развитие иммунологического метода исследования идет как по линии совершенствования реагентов (чистоты антигенов и антител), так и по линии создания автоматизированных систем постановки реакций и их инструментального учета.
Виды реакций метода иммунологического исследования.
В зависимости от их механизма и учета результатов, иммунологический метод исследования можно подразделить на 5 видов реакции.
1.Реакции, основанные на феномене агглютинации.
Агглютинация представляет собой склеивание клеток или отдельных частичек — носителей антигена с помощью иммунной сыворотки к этому антигену.
Реакция агглютинации бактерий с использованием соответствующей антибактериальной сыворотки относится к наиболее простым серологическим реакциям. Взвесь бактерий добавляют к различным разведениям испытуемой сыворотки крови и через определенное время контакта при t 37° регистрируют, при каком наивысшем разведении сыворотки крови происходит агглютинация. Реакцию агглютинации бактерий используют для диагностики многих инфекционных болезней: бруцеллеза, туляремии, брюшного тифа и паратифов, бациллярной дизентерии, сыпного тифа.
Реакции агглютинации для определения группы крови и резус-фактора основаны на взаимодействии аллоантител (изоантител) и антигенов эритроцитов. Антитела против резус-фактора являются неполными, они не способны к прямой реакции с резус-положительными эритроцитами, поэтому для их обнаружения используют реакцию Кумбса, основанную на выявлении неполных антител с помощью антиглобулиновых сывороток. К эритроцитам известной специфичности добавляют исследуемую сыворотку крови, а вслед за этим антиглобулиновую сыворотку против lgG (непрямая реакция Кумбса). Fab-фрагменты неполных антител исследуемой сыворотки крови присоединяются к эритроцитам, а к свободным Fc-фрагментам этих антител присоединяются антитела против lgG, и происходит агглютинация эритроцитов.
Реакция пассивной или непрямой гемагглютинации (РПГА, РНГА). В ней используют эритроциты или нейтральные синтетические материалы (например, частицы латекса), на поверхности которых сорбированы антигены (бактериальные, вирусные, тканевые) или антитела. Их агглютинация происходит при добавлении соответствующих сывороток или антигенов. Эритроциты, сенсибилизированные антигенами, называют антигенным эритроцитарным диагностикумом и используют для выявления и титрования антител. Эритроциты, сенсибилизированные антителами, называют иммуноглобулиновыми эритроцитарными диагностикумами и применяют для выявления антигенов.
Реакцию пассивной гемагглютинации используют для диагностики заболеваний, вызванных бактериями (брюшной тиф и паратифы, дизентерия, бруцеллез, чума, холера и др.), простейшими (малярия) и вирусами (грипп, аденовирусные инфекции, вирусный гепатит В, корь, клещевой энцефалит, крымская геморрагическая лихорадка и др.), а также для определения некоторых гормонов, выявления повышенной чувствительности больного к лекарственным препаратам и гормонам, например пенициллину и инсулину.
Реакция торможения гемагглютинации (РТГА) основана на феномене предотвращения (торможения) иммунной сыворотки гемагглютинации эритроцитов вирусами, используется для выявления и титрования противовирусных антител. Она служит основным методом серодиагностики гриппа, кори, краснухи, эпидемического паротита, клещевого энцефалита и других вирусных инфекций, возбудители которых обладают гемагглютинирующими свойствами, например, для серодиагностики клещевого энцефалита, в лунки панели разливают двукратные разведения сыворотки больного на щелочном боратном буферном растворе. Затем добавляют определенное количество, обычно 8 АЕ (агглютинирующих единиц), антигена клещевого энцефалита и после 18 ч экспозиции при t 4° вносят взвесь гусиных эритроцитов, приготовленную на кислом фосфатно-буферном растворе. Если в сыворотке крови больного есть антитела к вирусу клещевого энцефалита, то антиген нейтрализуется и агглютинация эритроцитов не происходит.
2.Реакции, основанные на феномене преципитации.
Преципитация происходит в результате взаимодействия антител с растворимыми антигенами. Простейшим примером реакции преципитации является образование в пробирке непрозрачной полосы преципитации на границе наслоения антигена на антитело. Широко применяют различные разновидности реакции преципитации в полужидких гелях агара или агарозы (метод двойной иммунодиффузии по Оухтерлоню, метод радиальной иммунодиффузии, иммуноэлетрофорез), которые носят одновременно качественный и количественный характер. В результате свободной диффузии, в геле антигенов и антител в зоне оптимального их соотношения образуются специфические комплексы — полосы преципитации, которые выявляют визуально или при окрашивании. Особенностью метода является то, что каждая пара антиген-антитело формирует индивидуальную полосу преципитации, и реакция не зависит от наличия в исследуемой системе других антигенов и антител.
Для постановки двойной иммунодиффузии наливают слой растопленного геля на стеклянную пластинку и после затвердевания вырезают лунки диаметром 1,5–3 мм. В расположенные по кругу лунки помещают исследуемые антигены, а в центральную лунку — иммунную сыворотку известной специфичности. Диффундируя навстречу друг другу, гомологичные сыворотки и антигены образуют преципитат.
При радиальной иммунодиффузии (по методу Манчини), иммунную сыворотку вносят в агар. Антиген, помещенный в лунки, диффундирует через агар, и в результате преципитации с иммунной сывороткой, вокруг лунок образуются непрозрачные кольца, внешний диаметр которых пропорционален концентрации антигена. Метод используют для определения классов иммуноглобулинов, а модификации метода можно применять для определения противомикробных антител, относящихся к различным классам иммуноглобулинов.
Иммуноэлектрофорез основан на усилении миграции в геле антигенов и антител путем помещения пластины геля с реагентами в электрическое поле. При этом достигается разделение антигенов и антител на компоненты в соответствии с их подвижностью и зарядом.
Разновидностью иммуноэлектрофореза является радиоиммунофорез. В этом случае после электрофоретического разделения антигенов в канавку, вырезанную параллельно движению антигенов в геле, наливают сначала меченную радиоактивным йодом иммунную сыворотку против определяемых антигенов, а затем иммунную сыворотку против lgG-антител, которая преципитирует образовавшиеся комплексы антитела с антигеном. Все несвязавшиеся реагенты вымывают, а комплекс антиген-антитело обнаруживает методом авторадиографии.
3.Реакции с участием комплемента.
В качестве комплемента используют свежую сыворотку крови морской свинки, основанную на способности субкомпонента комплемента Clq и затем других компонентов комплемента присоединяться к иммунным комплексам.
Реакция связывания комплемента (РСК) позволяет титровать антигены или антитела по степени фиксации комплемента комплексом антиген-антитело. Эта реакция состоит из двух фаз: взаимодействия антигена с испытуемой сывороткой крови (исследуемая система) и взаимодействия гемолитической сыворотки с эритроцитами барана (индикаторная система). При положительной реакции в исследуемой системе происходит связывание комплемента, и тогда при добавлении сенсибилизированных антителами эритроцитов, гемолиза не наблюдается. Реакцию применяют для серодиагностики сифилиса (реакция Вассермана), вирусных и бактериальных инфекций.
Реакция радиального гемолиза эритроцитов может протекать в геле. Взвесь эритроцитов барана помещают в агарозный гель с комплементом; в застывшем на стекле слое делают лунки и вносят в них гемолитическую сыворотку. Вокруг лунок в результате радиальной диффузии антител образуется зона гемолиза, радиус которой прямо пропорционален титру сыворотки. Если сорбировать на эритроцитах какой-либо антиген, например гликопротеиновый гемагглютинин вируса гриппа, краснухи или клещевого энцефалита, то можно воспроизвести феномен гемолиза иммунными сыворотками к этим вирусам. Реакцию радиального гемолиза в геле применяют в диагностике вирусных инфекций. Она характеризуется простотой постановки, нечувствительностью к сывороточным ингибиторам, позволяет титровать сыворотки крови по диаметру зоны гемолиза, не прибегая к серийным разведениям.
Иммунное прилипание. Эритроциты, тромбоциты и другие клетки крови имеют на поверхности рецепторы к третьему компоненту комплемента (СЗ). Если к антигену (бактериям, вирусам и др.) добавить соответствующую иммунную сыворотку и комплемент, то образуется комплекс антиген-антитело, покрытый СЗ-компонентом комплемента. Эту реакцию применяют при изучении ряда вирусных инфекций (клещевого энцефалита, денге), которые сопровождаются иммунопатологическими процессами и циркуляцией в крови вирусных антигенов в комплексе с антителами.
Основана на способности антител нейтрализовать некоторые специфические функции макромолекулярных или растворимых антигенов, например активность ферментов, токсины бактерий, болезнетворность вирусов. В бактериологии эту реакцию используют для обнаружения антистрептолизинов, антистрептокиназы и антистафилолизинов. Реакцию нейтрализации токсинов можно оценивать по биологическому эффекту, так, например, титруют антистолбнячные и антиботулинические сыворотки. Смесь токсина с антисывороткой, введенная животным, не вызывает их гибели. Различные варианты реакции нейтрализации применяют в вирусологии. При смешивании вирусов с соответствующей антисывороткой и введении этой смеси животным или в клеточные культуры, патогенность вирусов нейтрализуется и при этом животные не заболевают, а клетки культур не подвергаются деструкции.
5.Реакции с использованием химических и физических меток (ИФА).
Иммунофлюоресценция заключается в использовании меченых флюорохромом антител, точнее, иммуноглобулиновой фракции антител lgG. Меченое флюорохромом антитело образует с антигеном комплекс антиген-антитело, который становится доступным наблюдению под микроскопом в УФ-лучах, возбуждающих свечение флюорохрома. Реакцию прямой иммунофлюоресценции используют для изучения клеточных антигенов, выявления вируса в зараженных клетках и обнаружения бактерий и риккетсий в мазках. Так, для диагностики бешенства, отпечатки кусочков мозга животных, подозреваемых на вирусоносительство, обрабатывают люминесцирующей антирабической сывороткой. При положительном результате, в цитоплазме нервных клеток выявляются глыбки ярко-зеленого цвета. На обнаружении антигенов вирусов в клетках отпечатков со слизистой оболочки носа основана экспресс-диагностика гриппа, парагриппа и аденовирусной инфекции.
Более широко применяют метод непрямой иммунофлюоресценции, основанный на выявлении комплекса антиген-антитело с помощью люминесцирующей иммунной сыворотки против lgG-антител и используемой для обнаружения не только антигенов, но и титрования антител. Метод нашел применение в серодиагностике герпеса, цитомегалии, лихорадки Ласса. Препараты с наслоенной исследуемой сывороткой крови помещают в термостат при t 37° для образования иммунных комплексов, а затем, после отмывания несвязавшихся реагентов, выявляют эти комплексы меченой люминесцирующей сывороткой против глобулинов человека. Применяя меченые иммунные сыворотки против lgM- или lgG-антител, можно дифференцировать тип антител и обнаруживать ранний иммунный ответ по наличию lgM-антител.
Иммунофлюоресценцию широко используют не только в бактериологии, вирусологии, паразитологии, но и в иммунопатологии для обнаружения антител к тканевым антигенам человека.
Иммуноферментные или энзим-иммунологические методы основаны на использовании антител, конъюгированных с ферментами, главным образом пероксидазой хрена или щелочной фосфатазой. Чтобы обнаружить соединение меченых антител с антигеном, добавляют субстрат, разлагаемый присоединенным к lgG ферментом, с окрашиванием в желто-коричневый (пероксидаза) или желто-зеленый (фосфатаза) цвет. Используют также ферменты, разлагающие не только хромогенный, но и люмогенный субстрат. В этом случае при положительной реакции появляется свечение. Подобно иммунофлюоресценции, иммуноферментный метод применяют для обнаружения антигенов в клетках или титрования антител на антигенсодержащих клетках.
Наиболее популярной разновидностью иммуноферментного метода является иммуносорбция. На твердом носителе, которым могут быть целлюлоза, полиакриламид, декстран и различные пластмассы, сорбируют антиген. Чаще носителем служит поверхность лунок микропанелей. В лунки с сорбированным антигеном вносят исследуемую сыворотку крови, затем меченую ферментом антисыворотку и субстрат. Положительные результаты учитывают по изменению цвета жидкой среды. Для обнаружения антигенов, на носитель сорбируют антитела, затем вносят в лунки исследуемый материал и проявляют реакцию меченой ферментом антимикробной сывороткой. Повышению чувствительности иммунофлюоресцентного и иммуноферментного методов способствует введение в систему реакции авидина и биотина.
Радиоиммунологический метод основан на применении радиоизотопной метки антигенов или антител. Является наиболее чувствительным методом определения антигенов и антител, используется для определения гормонов, лекарственных веществ и антибиотиков, для диагностики бактериальных, вирусных, риккетсиозных, протозойных заболеваний, исследования белков крови, тканевых антигенов. Первоначально он был разработан как специфический метод измерения уровня циркулирующих в крови гормонов. Тест-системой являлись меченый радионуклидом гормон (антиген) и антисыворотка к нему. Если к такой антисыворотке добавить материал, содержащий искомый гормон, то он свяжет часть антител, при последующем внесении меченого титрованного гормона с антителами свяжется уменьшенное по сравнению с контролем его количество. Результат оценивают по сопоставлению кривых связанной и несвязанной радиоактивной метки. Эта разновидность метода носит название конкурентной реакции. Существуют и другие модификации радиоиммунологического метода.
Иммуногистологические методы предназначены для определения антигенов на поверхности или внутри клетки, например для обнаружения маркеров лимфоцитов и иммунокомплексов при гломерулонефритах и других заболеваниях почек. В этой реакции для выявления антигенов пользуются или иммунофлюоресценцией, или иммуноферментными конъюгатами с пероксидазой. Количество специфических антигенов определяют по интенсивности окрашивания. Иногда используют автоматическую регистрацию с помощью спектрофотометра.
