Что такое пцр тест на герпес

Что такое пцр тест на герпес

Исследование для выявления возбудителя герпес-вирусной инфекции 1-го и 2-го типа (Herpes Simplex Virus 1/2), в ходе которого с помощью метода полимеразной цепной реакции в реальном времени (РТ-ПЦР) определяется генетический материал (ДНК) вируса простого герпеса.

Вирус герпеса, вирус простого герпеса 1-го (HSV-1) и 2-го (HSV-2) типа, определение герпеса по ДНК.

Синонимы английские

Herpes Simplex Virus, Type 1 and Type 2, HSV-1 or HSV-2 IgM or IgG, HSV-1, HSV-2, HHV1, HHV2.

Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Мазок из зева (ротоглотки), секрет простаты, первую порцию утренней мочи, соскоб из прямой кишки, слюну, соскоб с эрозивно-язвенных элементов, соскоб урогенитальный, эякулят, венозную, капиллярную кровь, ликвор.

Общая информация об исследовании

Методом ПЦР возможно выявить даже небольшое количество вирусных частиц в биологическом материале. Он позволяет идентифицировать вирусы герпеса вне зависимости от срока заражения даже в тот период, когда антитела еще не образовались.

Наиболее распространенными являются 1-й и 2-й типы герпеса. Оба заразные и способствуют появлению на слизистых оболочках маленьких пузырьков (везикул), которые лопаются, образуя открытые ранки. При HSV-1 пузырьки появляются вокруг рта и в ротовой полости, тогда как HSV-2 обычно поражает участки в районе гениталий.

В случае первичного инфицирования на месте заражения через две недели обычно образуются болезненные пузырьки, которые, как правило, проходят через четыре недели. Они появляются на половых органах, вокруг ануса, на ягодицах либо на бедрах, после чего могут лопаться. Кроме того, возможно появление симптомов, напоминающих грипп, например озноба и болей в горле.

Однако пузырьки при герпесе образуются не всегда. Иногда проявления болезни бывают настолько слабыми, что остаются незамеченными либо ошибочно принимаются за что-то другое, например за укусы насекомых или за аллергию. После попадания инфекции в организм и ее распространения вирус герпеса находится в латентной форме. При стрессе или других заболеваниях, приводящих к снижению иммунитета, он может активизироваться заново. В большинстве случаев простой герпес не опасен для здоровья, однако он может вызывать тяжелые заболевания: неонатальный герпес (если ребенок заразится при родах от матери, инфицированной генитальным герпесом) и энцефалит. Они способны привести к серьезным неизлечимым неврологическим заболеваниям и даже к смерти. Риск заражения герпесом повышают следующие факторы:

В настоящее время излечение от герпеса не представляется возможным, тем не менее существуют противовирусные препараты, которые подавляют его распространение, а также укорачивают продолжительность острой фазы вирусной инфекции и смягчают симптомы болезни.

Для чего используется исследование?

Когда назначается исследование?

Источник

Инфекция, вызываемая вирусом простого герпеса

Вирус простого герпеса (ВПГ) – ДНК–содержащий вирус Herpes simplex virus семейства Herpesviridae подсемейства Alphaherpesvirinae. Согласно статистическим данным ВОЗ, инфекции, обусловленные ВПГ, занимают второе место по распространенности среди вирусных заболеваний человека. Различают два серотипа ВПГ – ВПГ-1 и ВПГ-2. Оба типа вируса вызывают инфекционные заболевания человека различной степени тяжести от характерных везикулезных или пустулезных высыпаний на коже и слизистых до поражений ЦНС. ВПГ-1 – причина офтальмогерпеса, протекающего в форме кератита или кератоиридоциклита, реже увеита, в единичных случаях — ретинита, блефароконъюнктивита. Заболевание может привести к помутнению роговицы и вторичной глаукоме. ВПГ-1 — основная причина энцефалита у взрослого населения стран умеренного климата, при этом только у 6–10% больных отмечается одновременное поражение кожи.

В ходе проведения эпидемиологических исследований установлено наличие специфических АТ к ВПГ у 90–95% обследуемых лиц среди взрослого населения, при этом первичная инфекция манифестно протекает лишь у 20–30% инфицированных.

ВПГ характеризуется коротким циклом репродукции в клеточных культурах и оказывает сильное цитопатическое действие. Он способен к репродукции в различных типах клеток, чаще персистирует в ЦНС, преимущественно в ганглиях, поддерживая латентную инфекцию с возможностью периодической реактивации. Наиболее часто вызывает кожно-слизистые формы заболевания, а также поражение ЦНС и глаз. Геном ВПГ может интегрироваться с генами других вирусов (включая ВИЧ), вызывая их активацию, также возможен его переход в активное состояние на фоне развития иных вирусных и бактериальных инфекций.

Пути передачи ВПГ: воздушно-капельный, половой, контактно-бытовой, вертикальный, парентеральный. Факторами передачи ВПГ служат кровь, слюна, моча, везикулярный и вагинальный секрет, сперма. Входными воротами являются поврежденные слизистые оболочки и кожа. По периферическим нервам вирус доходит до ганглиев, где сохраняется пожизненно. При активации ВПГ распространяется по нерву к первоначальному очагу поражения (механизм “замкнутого цикла” – циклическая миграция вируса между ганглием и поверхностью кожи). Может происходить лимфогенная и гематогенная диссеминация возбудителя, что особенно характерно для недоношенных новорожденных и лиц с выраженным иммунодефицитом (в т. ч. при ВИЧ-инфекции). ВПГ обнаруживается на лимфоцитах, эритроцитах, тромбоцитах, при проникновении вируса в ткани и органы возможно их повреждение вследствие его цитопатического действия. Сохраняющиеся в течение всей жизни у человека вируснейтрализующие АТ (даже в высоких титрах), хотя и препятствуют распространению инфекции, но не предупреждают рецидивов.

Выделение ВПГ продолжается значительное время при первичном инфицировании (ДНК выявляется в плазме крови в течение 4–6 недель), при рецидивах – не более 10 дней. Формирование противогерпетического иммунитета происходит как при манифестном, так и при бессимптомном течении инфекции. При первом контакте АГ с клетками иммунной системы в течение 14–28 дней формируется первичный иммунный ответ, который у иммунокомпетентных лиц проявляется образованием интерферонов, выработкой специфических АТ (вначале – IgM, впоследствии – IgA и IgG), повышением активности естественных киллеров – NK-клеток и формированием мощного пула высокоспециализированных киллеров. В случае реактивации или реинфекции возникает повторный контакт клеток иммунной системы с АГ, образуются АТ и Т-киллеры. Реактивация сопровождается продукцией АТ IgM (редко даже при наличии типичных высыпаний), АТ IgА (чаще) и IgG.

ВПГ (преимущественно ВПГ-2) вызывает генитальный герпес – хроническое рецидивирующее заболевание. Клинические проявления первичного эпизода инфекции, вызванной разными типами вируса сходны, однако инфекции, вызванной ВПГ-2, в гораздо большей степени свойственен рецидивирующий характер. Передача вируса происходит при половых контактах, очаг инфекции локализуется на слизистой и коже половых органов и перигенитальной зоны. Размножение вируса в клетках эпителия приводит к образованию очага сгруппированных пузырьков (папул, везикул), в которых содержатся вирусные частицы, сопровождается покраснением, зудом. Первичный эпизод протекает острее (обычно с симптомами интоксикации), чем последующие рецидивы. Часто возникают симптомы дизурии, признаки эрозии шейки матки.

На ранних стадиях ВИЧ-инфекции течение заболеваний, вызванных ВПГ-1 или ВПГ-2, короткое и типичное. Частым признаком углубления иммуносупрессии и перехода латентной стадии ВИЧ-инфекции в стадию вторичных заболеваний служит развитие опоясывающего лишая. Наличие стойких глубоких вирусных поражений кожи, повторный или диссеминированный опоясывающий лишай, локализованная саркома Капоши — одни из клинических критериев стадии вторичных заболеваний ВИЧ-инфекции. У больных с количеством CD4+-клеток менее 50 клеток/мкл отсутствует тенденция к самостоятельному заживлению эрозивно-язвенных дефектов. Частота герпетического энцефалита среди поражений ЦНС при ВИЧ-инфекции — около 1–3%. У больных СПИДом с наличием глубокого иммунодефицита заболевание нередко протекает атипично: болезнь начинается подостро и медленно прогрессирует до тяжелейших проявлений энцефалита.

Герпетическая инфекция даже при бессимптомном течении способна вызвать целый ряд патологий у беременной и новорожденного. Наибольшую угрозу репродуктивной функции представляет генитальный герпес, который в 80% случаев обусловлен ВПГ-2 и в 20% – ВПГ-1. Бессимптомное течение чаще имеет место у женщин и более типично для ВПГ-2, чем для ВПГ-1. Первичное инфицирование или рецидивы во время беременности наиболее опасны для плода, поскольку могут привести к самопроизвольному выкидышу, гибели плода, мертворождению, порокам развития. Заражение плода и новорожденного чаще отмечается при бессимптомном течении генитального герпеса, чем при клинически выраженном типичном течении. Новорожденный может приобрести герпетическую инфекцию внутриутробно, во время родов (в 75–80% случаев), либо постнатально.

ВПГ-2 может проникать в полость матки через цервикальный канал с поражением плода в 20–30% случаев; трансплацентарное инфицирование может происходить в 5–20% случаев, инфицирование во время родов – в 40% случаев. Возможна передача вируса при выполнении медицинских процедур. При типичных клинических проявлениях диагноз герпетической инфекции трудностей не представляет, тогда как при атипичных формах верифицируется на основании результатов лабораторных исследований, при этом приоритетными должны быть исследования, направленные на выявление маркеров текущей (активной) инфекции. Активация инфекционного процесса при герпетической инфекции, даже при наличии клинических проявлений в стадии обострения, редко сопровождается выработкой АТ-ВПГ IgM (чаще – при первичной инфекции либо реинфекции), как правило, при этом отмечают появление АТ-ВПГ IgА.

Целесообразными являются диагностические исследования для обнаружения ВПГ или его маркеров при наличии в анамнезе пациента указаний на рецидивирующую инфекцию либо на дебют герпетической инфекции в период беременности.

Дифференциальная диагностика. При наличии инфекционного синдрома (длительный субфебрилитет, лимфаденопатия, гепато- или гепатоспленомегалия) – токсоплазмоз, цитомегаловирусная инфекция и инфекция, вызванная ВЭБ; контактный дерматит, инфекционные заболевания, сопровождающиеся везикулезными высыпаниями на коже и слизистых оболочках (ветряная оспа, опоясывающий герпес, пиодермия и др.); эрозивно–язвенные поражения гениталий, обусловленные Treponema pallidum, Haemophilus ducreyi; болезнь Крона, синдром Бехчета, фиксированная токсикодермия, менингоэнцефалиты и менингиты неясной этиологии, увеиты и кератоконъюнктивиты неясной этиологии).

Показания к обследованию

Материал для исследования

Этиологическая лабораторная диагностика включает микроскопическое исследование, выделение и идентификация вируса в культуре клеток, выявление АГ или ДНК возбудителя, определение специфических АТ.

Материал с поверхности высыпаний может быть использован для микроскопических (окраска препаратов по Романовскому–Гимзе) или цитологических (окраска препаратов по Тцанку и Папаниколау) исследований. Названные процедуры имеют низкую диагностическую специфичность (не позволяют дифференцировать ВПГ от других герпес-вирусов) и чувствительность (не более 60%), поэтому не могут считаться надежными методами диагностики.

Выявление АГ ВПГ в крови, СМЖ, содержимом везикулезных или пустулезных высыпаний и других локусов (носоглотки, конъюнктивы, уретры, влагалища, цервикального канала) проводят методами РИФ и РНИФ с использованием моноклональных или высокоочищенных поликлональных АТ. При использовании метода ИФА чувствительность исследования возрастает до 95% и более, специфичность при манифестном герпесе варьирует от 62 до 100%. Однако большинство наборов реагентов для выявления антигена ВПГ методом ИФА не позволяют провести дифференцирование серотипов вируса.

Обнаружение ДНК ВПГ-1 и/или ВПГ-2 при использовании ПЦР в различном биологическом материале превосходит чувствительность обнаружения ВПГ при использовании вирусологического исследования. Выявление ВПГ в соскобах со слизистых оболочек полости рта, урогенитального тракта, в отделяемом пузырьковых высыпаний (везикул) и эрозивно–язвенных поражений кожи с помощью ПЦР является методом выбора. Несомненную ценность имеет определение количества ДНК ВПГ методом ПЦР в режиме реального времени, результаты исследования можно использовать как с диагностической целью, так и для оценки эффективности лечения.

Для выявления АТ к ВПГ разных классов IgА, IgG, IgM, суммарных к антигенам ВПГ обоих типов или типоспецифичных, применяют методы РНИФ или ИФА, для определения авидности АТ IgG – метод ИФА. Наибольшее диагностическое значение имеет детекция АТ IgM как показателя активности процесса, их выявление может свидетельствовать об остром заболевании, реинфекции, суперинфекции или реактивации. Однако в клинически выраженных случаях, в т. ч. при типичном течении генитального или неонатального герпеса, специфические АТ IgM выявляются редко (в 3–6% случаев). Определение авидности АТ-ВПГ IgG несет низкую информационную нагрузку: реактивация при клинически выраженных случаях сопровождалась наличием высокоавидных АТ. Тест на выявление АТ-ВПГ IgА является методом выбора наряду с определением ДНК либо АГ ВПГ при определении активности инфекционного процесса.

Показания к применению различных лабораторных исследований. Определение АТ целесообразно проводить для подтверждения первичной инфекции, а также установления диагноза у пациентов с бессимптомным и атипичным течением заболевания.

У беременных женщин (скрининг) целесообразно проведение исследований для выявления АТ-ВПГ IgМ, а также выявление АТ-ВПГ IgА. Для беременных высокого инфекционного риска дополнительно рекомендуется определение ДНК и АГ ВПГ в лейкоцитарной взвеси или в материале из предполагаемого очага.

При подозрении на внутриутробную инфекцию рекомендуется выявление ДНК вируса в пуповинной крови, у новорожденных – детекция ДНК вируса в различных биологических пробах (отделяемое пузырьковых высыпаний (везикул) эрозивно– язвенных поражений кожи и слизистых оболочек, ротоглотки, конъюнктивы; периферическая кровь, СМЖ, моча и др.), а также определение АТ-ВПГ IgМ и IgА в крови. Учитывая высокую диагностическую значимость определения ДНК вируса методом ПЦР и наличие зависимости между летальностью у новорожденных и виремией, вызванной ВПГ, некоторые исследователи рекомендуют использовать этот метод для лабораторного скрининга генерализованной герпетической инфекции детей, относящихся к группе высокого риска.

Выявление АГ-ВПГ в различных биологических пробах предлагается применять в качестве экспресс-тестов для дифференцирования типов вируса при скрининге популяций с высоким уровнем заболеваемости, а также при мониторинге заболевания.

У больных ВИЧ-инфекцией с атипичными клиническими проявлениями кожных поражений в диагностике отдается предпочтение выявлению ДНК ВПГ методом ПЦР как самому чувствительному методу лабораторной диагностики.

Особенности интерпретации результатов. Обнаружение вирусоспецифических АТ IgM может свидетельствовать о первичной инфекции, реже – о реактивации или реинфекции, выявление АТ-ВПГ IgА – об активности инфекционного процесса (затяжное течение при дебюте герпетической инфекции, реинфекции или реактивации). О врожденной инфекции (неонатальный герпес) свидетельствует присутствие АТ-ВПГ IgM и(или) IgА. Выявление АТ IgG отражает латентную инфекцию (инфицирование).

Выявление ДНК ВПГ свидетельствует о наличии активной (репликативной) стадии вирусной инфекции с учетом выраженности клинических проявлений. Выявление ДНК ВПГ-1 и/или ВПГ-2 методом ПЦР позволяет при однократном тестировании установить факт внутриутробного инфицирования плода; при проведении обследования в первые 24–48 ч после рождения лабораторно подтвердить врожденную инфекцию, вызванную ВПГ.

Диагностическое значение (специфичность и чувствительность) обнаружения ДНК ВПГ в СМЖ у больных ВИЧ-инфекцией с поражением ЦНС окончательно не установлены. Возможно, для подтверждения герпетической этиологии энцефалита необходимо определение концентрации ДНК ВПГ в СМЖ. Исследование для обнаружения ДНК ВПГ в крови малоинформативно в связи кратковременным нахождением ВПГ в сосудистом русле, следовательно, возможно получение отрицательного результата несмотря на развитие клинически выраженного заболевания.

Источник

Вирус герпеса 1,2 типов, ДНК (HHV-1,2, ПЦР) плазма, кач. в Москве

Исследование направлено на выявление ДНК вируса простого герпеса 1 и 2 типа в крови с помощью полимеразой цепной реакции (ПЦР).

Приём и исследование биоматериала

Когда нужно сдавать анализ Вирус герпеса 1,2 типов, ДНК (HHV-1,2, ПЦР) плазма, кач.?

Подробное описание исследования

Вирус простого герпеса является одним из самых распространенных возбудителей, поражающих человеческий организм. Выделяют 2 типа вируса простого герпеса.

Такое разделение не является строгим. Оба типа вируса способны поражать вышеуказанные органы и ткани.

Инфицирование вирусом простого герпеса происходит в раннем детском возрасте. Возбудитель обладает высокой контагиозностью (заразностью) и передается от человека к человеку половым, контактно-бытовым и воздушно-капельным путями и
По разным данным, от 90 до 95% взрослых людей являются носителями вируса простого герпеса.

При генитальном герпесе возможно развитие герпетического цистита и уретрита. При данном заболевании появляются боли при мочеиспускании, может возникнуть гематурия (кровь в моче), изменяются частота, характер струи, количество мочи. Также может отмечаться зуд и покраснение кожных покровов половых органов.

Такие состояния, как ослабление иммунитета, длительные стрессы, долгое пребывание на солнце, оперативное вмешательство и другие причины провоцируют реактивацию инфекции.

Тяжелое течение заболевания отмечается у новорожденных и людей с иммунодефицитами разного происхождения (ВИЧ, прием подавляющих иммунитет препаратов).

Выявление генетического материла вируса в крови позволяет быстро и точно идентифицировать возбудителя.

Источник

Откуда «берутся» часто болеющие, или что нужно знать о герпес-вирусах

Герпес и иммунитет

Герпес-вирусы, вопреки распространенному мнению, провоцируют не только «простуду» на губах или половых органах, но и патологии дыхательной, мочевой, нервной и даже пищеварительной систем.

Правда у каждого вида есть свои излюбленные места для «обитания», где после заражения вирус остается «пожизненно». И для:

При этом, в случае первых трех типов, активация вируса является следствием, но не причиной снижения иммунитета.

Персистенция же других – доказанный фактор подавления иммунитета, и в частности:

Результатом такого влияния становятся регулярные и длительные ОРЗ и ОРВИ, циститы и другие воспалительные заболевания. А также хронизация острых патологий и частые обострения уже имеющихся хронических.

А в случае вируса Эпштейн-Барра – это еще и риск лимфом и других лимфопролиферативных заболеваний, а также аутоиммунных патологий ревматоидного типа.

Как проверить инфицированность

Как уже было отмечено, герпетические инфекции 4-5 типов, по симптомам, почти не отличить от «обычных» ОРВИ. При этом инфицированность среди населения составляет около 90%, а заражение происходит еще в детстве.

Правда острый инфекционный процесс и персистенция, к счастью, развиваются далеко не у всех, кто успел «познакомиться» с герпесом. Поэтому заподозрить инфицированность может помочь только высокая частота заболеваемости у конкретного пациента.

Проверить такую «догадку» позволяет:

1. ПЦР-диагностика мазка из зева и носа, мочи (в случае циститов) и любых других «интересующих» локаций на:

Проводить такой анализ лучше во время острой фазы воспаления, еще до начала лекарственной терапии (в том числе местной, в виде полосканий, ингаляций и прочих процедур).

2. Анализ крови на антитела:

Данное исследование позволяет выявлять реакцию иммунитета на контакт с возбудителем. Кроме того, дополнительное определение авидности IgG антител к интересующему вирусу позволяет выявить относительные сроки инфицирования (менее или более 6 месяцев), что может иметь значение при беременности и диагностике внутриутробного инфицирования.

А иммуноблот антител – «предоставит» лечащему врачу максимально подробную информацию о стадийности и агрессивности инфекционного процесса.

Источник

Что такое пцр тест на герпес

Определение ДНК вируса простого герпеса второго типа в крови с использованием полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (ПЦР) – это молекулярно-генетическое исследование, позволяющее установить инфицированность этим патогеном.

Вирус герпеса, вирус простого герпеса 2 типа, определение ДНК простого вируса герпеса 2 типа.

Herpes Simplex Virus Type 2, HSV-2, HHV2.

Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозная кровь, капиллярная кровь, ликвор, мазок из зева (ротоглотки), отделяемое конъюнктивы, секрет простаты, первая порция утренней мочи, соскоб из прямой кишки, слюна, соскоб урогенитальный, эякулят.

Общая информация об исследовании

ПЦР-диагностика вируса простого герпеса 2 типа – анализ, применяемый для диагностики инфекции, вызванной вирусом, с помощью определения генетического материала (ДНК) возбудителя в исследуемом биологическом материале.

В медицинской практике анализ обычно назначается для диагностики генитального герпеса; дифференциальной диагностики морфологических элементов заболеваний, передающихся половым путем; подтверждения диагноза при симптомах герпетического поражения (язвах, пузырьках в области гениталий) или неонатального герпеса; обследования людей, страдающих заболеваниями, повышающими риск развития осложнений герпетической инфекции (ВИЧ, экзема, тяжелые ожоги, химиотерапия онкологических заболеваний, иммуносупрессивные препараты, применяемые при трансплантации органов); профилактического обследования здоровых людей; обследования пациентов при подготовке к трансплантации органов; обследования пациентов с отягощенным трансфузионным анамнезом; при планировании беременности.

Генитальный герпес проявляется крошечными пузырьками, наполненными жидкостью, появляющимися в перианальной области, на половых органах. После того как оболочка пузырьков разрывается, формируется струп, прикрывающий дефект. Проявления герпеса обычно исчезают в течение 2 недель.

Вирус простого герпеса передается от человека к человеку контактным способом (при незащищенных половых контактах, в том числе при оральном сексе). Клинические проявления заболевания, как правило, вызываются простым вирусом герпеса 2 типа, но вирус 1 типа также может вызывать заболевание как области гениталий, так и ротовой полости.

У некоторых людей генитальный герпес протекает со стертой клинической симптоматикой или в бессимптомном варианте. Тем не менее клинически значимые проявления этого заболевания очень болезненны, особенно при первом эпизоде болезни: жжение и боль в области половых органов, затруднения при мочеиспускании. У некоторых больных выявляются выделения из уретры или вагины.

Проявления заболевания у инфицированных людей могут повторяться эпизодически в ответ на стресс или ослабление иммунной системы.

У большинства инфицированных людей никогда не развиваются клинические проявления заболевания. Однако бессимптомные носители вируса являются источником инфекции.

Заболевание проходит несколько стадий, включающих жжение и зуд; блистер (малые, наполненные жидкостью пузырьки); струп. При дебюте заболевания у некоторых людей к наружным проявлениям присоединяются симптомы системного характера: лихорадка, боль в горле, головная боль, боли в мышцах, увеличение и болезненность периферических лимфоузлов.

У детей до 5 лет герпетические высыпания могут локализоваться в ротовой полости в виде язв. Маленькие дети руками могут перенести вирус на другие места на их теле (например, на конъюнктиву).

После эпизода герпетической инфекции, вирус находится в нервных клетках кожи, а при наличии определенных условий проявляется снова в виде активной инфекции. Рецидив может развиться при лихорадке, менструации, стрессе, усталости, воздействии солнца.

Люди с ослабленным иммунитетом находятся в группе риска развития осложнения герпетической инфекции. К состояниям, которые могут приводить к тяжелому течению заболевания, относятся ВИЧ, экзема, тяжелые ожоги, химиотерапия онкологических заболеваний, иммуносупрессивные препараты, применяемые при трансплантации органов. У некоторых людей вирус может поражать пальцы (в основном у маленьких детей), глаза, обширные участки кожи, другие органы (легкие, печень и мозг).

Для чего используется исследование?

Когда назначается исследование?

Что означают результаты?

Референсные значения: отрицательно.

Кто назначает исследование?

Акушер-гинеколог, уролог, инфекционист, дерматолог, неонатолог, педиатр, венеролог, терапевт, врач общей практики.

Источник

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *