Что такое рнк вич
ПЦР в диагностике ВИЧ-инфекции
В последние годы большой популярностью стал пользоваться метод обнаружения генного материала ВИЧ методами репликации (амплификации, размножения) специфических генных последовательностей, часто объединяемых под названием одного из вариантов этого метода «полимеразная цепная реакция» (ПЦР).
Этиологическим фактором ВИЧ-инфекции являются вирусы HIV-1 и HIV-2 (от англ. Human Immunodeficiency Viruses) из семейства Retroviridae. Патогенез ВИЧ-инфекции заключен в инфицировании вирусом клеток с фенотипом CD-4, присущий Т-лимфоцитам хелперам и некоторым другим клеткам организма человека. Прямое цитопатическое воздействие, оказываемое вирусом иммунодефицита на указанные клетки, в конечном итоге приводит к летальному исходу за счет активации оппортунистических инфекций или развития опухолей.
Лабораторная диагностика ВИЧ-инфекции проводится в трёх направлениях:
Особо необходимо отметить значение ПЦР в диагностике ВИЧ-инфекции у детей первого года жизни. Ранняя диагностика ВИЧ-инфекции у детей этого возраста в принципе невозможна без применения ПЦР. Это обусловлено тем, что ребёнок, родившийся от ВИЧ-инфицированной матери обязательно имеет антитела к вирусу иммунодефицита. Различить материнские и собственные антитела к ВИЧ не представляется возможным. У неинфицированного ребёнка данные антитела элиминируются под влиянием собственной иммунной системой к возрасту 6-9 месяцев, хотя в отдельных случаях могут циркулировать до 18 месяцев жизни, но не более этого срока.
Необходимо отметить, что обследование методом ПЦР имеет смысл только при полном отказе от грудного вскармливания ребёнка ВИЧ-позитивной матерью с момента рождения, т.к. риск заражения довольно высок и составляет около 5%.
Таким образом, ПЦР позволяет проводить дифференциальную диагностику ВИЧ-статуса у детей раннего возраста. Так, если имеет место положительный результат ПЦР на НК вируса иммунодефицита в первые 48 часов жизни, то ВИЧ-инфицирование произошло in utero. Если имеет место отрицательный результат ПЦР в первые 48 часов, но становится положительным в возрасте 7 – 14 дней жизни, то инфицирование произошло intrapartum.
В настоящее время ПЦР позволяет осуществлять не только диагностику, но и мониторинг лечения ВИЧ-инфекции путем определения концентрации РНК в плазме, а также выявления резистентных к химиотерапии штаммов вируса иммунодефицита. Определение “вирусной нагрузки” в плазме крови является наилучшим прогностическим критерием течения ВИЧ-инфекции и оценки эффективности антиретровирусной терапии.
Известные модификации ПЦР для диагностики ВИЧ-инфекции достигают чувствительности лишь в 98%, то есть выявляют лишь 98% проб от ВИЧ инфицированных лиц, что существенно ниже, чем при использовании ИФА (до 99,9%). По этой причине они не могут использоваться и как подтверждающие тесты, так как будут давать заведомо больше ложноотрицательных результатов, чем иммуноблот. Методика ПЦР на практике ведет себя как чересчур «чувствительная» к внешним колебаниям, и в неумелых руках, и в недостаточно хорошо оборудованных лабораторных условиях дает немалое количество неспецифических (ложноположительных) реакций. Специфичность ПЦР также зависит от подбора используемых в ней ингредиентов, в особенности, так называемых «праймеров», которые должны имитировать «генные последовательности ВИЧ», но далеко не всегда могут быть точно подобраны. Неудачный подбор может приводить, в частности, к тому, что такие тесты могут с разным успехом выявлять разные субтипы ВИЧ-1, например, выявлять субтип B и не выявлять субтип A и G т.п. Впрочем, разработка этих методик идет быстрыми темпами и не исключено скорое появление более качественных наборов стандартных реактивов. На практике врачи должны учитывать операционные характеристики предлагаемых им диагностических тестов, изначально предполагая, что их полевая (практическая) ценность может быть существенно ниже заявляемой производителями.
Обнаружение ВИЧ методом ПЦР в крови возможно в двух вариантах:
Сейчас ПЦР на ДНК провируса ВИЧ используется как диагностическая методика для прямой диагностики ВИЧ-инфекции в следующих случаях:
Количественное определение РНК ВИЧ в плазме (вирусная нагрузка)
Количественное определение РНК ВИЧ в плазме (вирусная нагрузка)
Методы
Воспроизводимость результатов.
Как показано в таблице 2.4, у каждой тест-системы свой порог и диапазон чувствительности (J Clin Microbiol 1996; 34:3016; J Med Virol 1996; 50:293; J Clin Microbiol 1996; 34:1058; J Clin Microbiol 1998; 36:3392). Два стандартных отклонения (95% доверительный интервал) для результатов тестов составляют 0,3–0,5 log10 (т. е. результаты могут отличаться в 2–3 раза) (J Infect Dis 1997; 175:247; AIDS 1999; 13:2269). Это значит, что 95% доверительный интервал для значения 10 000 копий/мл составляет от 3 100 до 32 000 копий/мл. Значения вирусной нагрузки, полученные при использовании тест-системы Amplicor 1.5 (Roche) и методом рДНК (Versant 3.0), близки, за исключением нижнего участка линейного диапазона (
Подтипы ВИЧ.
При определении вирусной нагрузки не-В-подтипов ВИЧ наблюдается значительно больший разброс показателей. Метод разветвленной ДНК (Versant 3.0) несколько превосходил остальные методики в отношении определения вирусной нагрузки ВИЧ подтипов A–D, F, G, CRF01_AE и CRF01_AG (межподтиповых рекомбинантных форм) и O; при использовании этого метода 83% результатов различались не более чем на 0,5 log10. При использовании Amplicor Monitor 1.5 этот показатель был 74%, а для NucliSens — 61% (J Clin Microbiol 2005; 43:3860). Результаты других исследований подтверждают эти данные (J Med Virol 2006; 78:883; J Acquir Immune Defic Syndr 2002; 29:330).
Таблица 2.4. Тесты на ВИЧ-1
| Метод | Чувст. | Дополнительные сведения |
|---|---|---|
| Стандартный протокол серологического тестирования | 99,7% | Доступное и недорогое. Чувствительность >99,7%, специфичность >99,9% (MMWR 1990; 38:380; N Engl J Med 1988; 319:961; JAMA 1991; 266:2861). |
| Экспресс-тест См. стр. 12–13 и таблицу 2.2 | 99,6% | Результат готов через 20 минут. Преимущества «простых» тестов по классификации CLIA (Ora-Quick и Uni-Gold Recombigen) состоят в том, что для тестирования не требуется лабораторного оборудования, получение результата занимает не более 20 минут и для интерпретации результата не требуется специальной подготовки. Отрицательный результат тестирования не требует подтверждения; положительный результат следует подтвердить методом вестерн блота. В таблице 2.2 перечислены экспресс-тесты, одобренные FDA для применения в США (www.cdc.gov/hiv/rapid-testing). Существуют и другие экспресс-тесты, но они не лицензированы FDA (Int J STD AIDS 2006; 17:357; Vox Sang 1997; 72:11; J Clin Microbiol 2004; 42:3850). |
| Анализ слюны (тест-система OraSure) | 99,6% | Приспособление для сбора IgG из слюны для исследования при помощи ИФА и вестерн блота. Преимущество: нет необходимости в венепункции. Чувствительность и специфичность сопоставимы с чувствительностью и специфичностью стандартного протокола серологического тестирования (JAMA 1997; 227:254). |
| Анализ мочи (Calypte HIV-1 Test) | >99% | Исследуется только методом ИФА, поэтому положительные резуль- таты должны подтверждаться при помощи стандартного протокола серологического тестирования. Проводится врачом. Стоимость невелика — около 4 долларов за тест. |
| Выделение вируса в культуре МКПК | 95–100% | МКПК пациента в течение 28 дней инкубируют со стимулирован- ными фитогемагглютинином донорскими МКПК в присутствии ИЛ-2. Метод дорогой и трудоемкий. Может быть качественным и количественным. Основное применение качественного метода — выделение вируса для дальнейшего изучения (например, секвенирования). Исследования, предшествовавшие появлению количественной ПЦР на РНК ВИЧ, показали, что результаты количественного анализа культуры коррелируют со стадией заболевания: средний титр ВИЧ у пациентов со СПИДом составлял 2000/106 клеток (N Engl J Med 1989; 321:1621). |
| ПЦР на провирусную ДНК | >99% | Качественная ПЦР на ДНК ВИЧ используется для обнаружения интегрированной в клетку провирусной ДНК, в том числе в периферических лимфоцитах CD4 (резервуарах ВИЧ) при обследовании пациентов, отвечающих на ВААРТ. Порог чувствительности метода составляет около 5 копий на 106 клеток (J Virol Methods 2005; 124:157). Считается недостаточно точным для установления окончательного диагноза ВИЧ-инфекции; его результаты требуют подтверждения. Метод не утвержден FDA (Ann Intern Med 1996; 124:803), хотя в отдельных случаях его используют при спорных или неопределенных результатах серологических тестов. |
| ПЦР на РНК ВИЧ | 95–98% | Ложноположительные результаты в 2–9% случаев, обычно показывают низкую вирусную нагрузку (10 000 копий/мл приближается к 100%. |
| Антиген р24 | 30–90% | Благодаря небольшой стоимости иногда используется в качестве альтернативы тесту на РНК ВИЧ для диагностики острой ВИЧ- инфекции. Специфичность 100%, но чувствительность около 90% — меньше, чем у количественных тестов на РНК ВИЧ (Ann Intern Med 2001; 134:25). Он также применяется в качестве экономичного способа определения вирусной нагрузки в условиях ограниченных ресурсов (J Clin Micro 2005; 43:506). |
Половые различия.
Показания.
Количественный метод определения РНК ВИЧ используется для диагностики острой ВИЧ-инфекции, прогноза вероятности передачи вируса, прогноза темпа прогрессирования ВИЧ-инфекции, выявления показаний к началу антиретровирусной терапии, а также для наблюдения за эффективностью лечения (Ann Intern Med 1995; 122:573; N Engl J Med 1996; 334:426; J Infect Dis 1997; 175:247; J Infect Dis 2002; 185:905).
Рекомендации
Приведены из клинических стандартов Американского отделения Международного общества борьбы со СПИДом (IAS-USA) (JAMA 2006; 296:827) и Министерства здравоохранения и социальных служб США (DHHS) (www.aidsinfo.nih.gov/guidelines).
Таблица 2.5. Сравнительная характеристика лицензированных FDA тест-систем, основанных на разных методах измерения вирусной нагрузки
| Roche | Bayer | bioMerieux | |
|---|---|---|---|
| Контактный телефон | 800-526-1247 | 800-434-2447 | 800-682-2666 |
| Торговое название | Amplicor HIV Monitor 1.5 | Versant HIV-1 RNA 3.0 | NucliSens HIV-1 QT |
| Техника | ОТ-ПЦР | рДНК | NASBA |
| Сравнение результатов | Результаты, получаемые методом ОТ-ПЦР, сопоставимы с результатами, получаемыми методом рДНК (Versant) с использованием тест-систем 2.0 и 3.0 | Результаты, получаемые методом рДНК, сопоставимы с результатами, получаемыми методом ОТ-ПЦР (Amplicor) | Результаты, по-видимому, сопоставимы с результатами, получаемыми методами ОТ-ПЦР и рДНК, но пока не получено достаточно данных |
| Преимущества и недостатки | Меньше ложноположительных результатов у ВИЧ-отрицательных пациентов по сравнению с методом рДНК | Выполнение исследования занимает меньше времени у лаборанта. Хороший динамический диапазон, но выше порог определения вирусной нагрузки | Может применяться для обнаружения вируса в тканях и биологических жидкостях, например, выделениях половых путей. Самый большой динамический диапазон. |
| Динамический диапазон | Стандартный (Amplicor 1.5): 400–750 000 копий/мл Суперчувствительный (Ultra-Direct 1.5): 50–100 000 копий/мл | рДНК 3.0: 75–500 000 копий/мл* | NucliSens HIV-1 QT: 176–3 500 000 копий/мл; динамический диапазон зависит от объема |
| Подтип вируса | Тест-система 1.5: от A до G | от A до G | от A до G |
| Необходимый объем материала для исследования | Amplicor: 0,2 мл Суперчувствительный: 0,5 мл | 1 мл | От 10 мкл до 2 мл |
| Пробирки | ЭДТА (пробирка с сиреневой крышкой) | ЭДТА (пробирка с сиреневой крышкой) | ЭДТА, гепарин, цельная кровь, любая биологическая жидкость, МКПК, семенная жидкость, ткани и т. д. |
| Требования | Отделить плазму не позже чем через 6 часов после забора крови, перед транспортировкой заморозить при температуре –20°С или –70°С. | Отделить плазму не позже чем через 4 часа после забора крови, перед транспортировкой заморозить при температуре –20°С или –70°С. | Отделить сыворотку или плазму не позже чем через 4 часа после забора крови, перед транспортировкой заморозить при температуре –20°С или –70°С. |
* Нижнее пороговое значение вирусной нагрузки, установленное FDA, составляет 75 копий/мл. За пределами США нижнее пороговое значение вирусной нагрузки составляет 50 копий/мл.
РНК ВИЧ, количественно
Добавить в корзину
ВИЧ-инфекция представляет собой заболевание, вызываемое вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ). Вирус иммунодефицита человека (РНК-содержащий вирус) — относится к семейству ретровирусов (Retroviridae).
Различают два типа:
Исходом ВИЧ-инфекции является СПИД (синдром приобретенного иммунодефицита) — это конечная стадия ВИЧ-инфекции, когда иммунная система человека поражается настолько, что становится неспособной сопротивляться любым видам инфекции. Любая инфекция, даже самая безобидная, способна привести к тяжелому заболеванию и летальному исходу.
Сегодня в мире отмечается пандемия ВИЧ-инфекции, заболеваемость населения планеты неуклонно растет. Источник инфекции — человек. Вирус у человека можно выделить из семенной жидкости, секрета шейки матки, лимфоцитов, плазмы крови, спинномозговой жидкости, слез, слюны, мочи и материнского молока, но концентрация вируса в них различна. Наибольшая концентрация вируса содержится в следующих биологических средах: в сперме, крови, секрете шейки матки.
Пути передачи ВИЧ
Вирус нестабилен и способен жить только в жидкостях организма человека и только внутри клеток. В связи с этим не существует опасности заразиться при поцелуях и бытовых контактах, при пользовании общим туалетом, через укусы насекомых, через слюну, питьевую воду и пищевые продукты.
Показания к проведению ПЦР РНК ВИЧ
Протекание ВИЧ-инфекции в организме человека делится на 5 стадий:
Качественный анализ крови на РНК ВИЧ с помощью метода ПЦР давно используется при ранней диагностике возможного заражения. Обычно его сдают через 7–10 дней после потенциального инфицирования вирусом ВИЧ. Метод ПЦР определяет уровень вирусной нагрузки и является одним из наиболее точных показателей эффективности медикаментозной терапии при ВИЧ-инфекции.
Пройти обследование на вирус типа HIV1 вы можете совершенно анонимно, обратившись в наши центры.
ОБЩИЕ ПРАВИЛА ПОДГОТОВКИ К АНАЛИЗАМ КРОВИ
Кровь берется из вены. Необходимо соблюдать общие рекомендации:
Вирус иммунодефицита человека, РНК HIV
Описание
Вирус иммунодефицита человека, РНК HIV, ПЦР real-time качественный — исследование, которое проводится с целью определения РНК ВИЧ типа 1 в плазме крови, методом ПЦР (полимеразной цепной реакции) в реальном времени (real-time или РТ-ПЦР). Исследование проводят для прогноза и мониторинга эффективности терапии.
Данный метод ныне является самым быстрым и достоверным методом диагностики инфекционных заболеваний.
При первичном инфицировании ВИЧ, метод ПЦР позволяет выявить РНК ВИЧ в крови уже спустя 10–14 суток после инфицирования.
ВИЧ (вирус иммунодефицита человека) — вирус семейства ретровирусов (вирус с медленной репликацией), который поражает клетки иммунной системы человека (CD4, Т-хелперы) и вызывает синдром приобретенного иммунодефицита.
ВИЧ является возбудителем синдрома приобретенного иммунодефицита (СПИД).
Пути передачи ВИЧ-инфекции — половой, при переливании крови, от заражённой матери к новорождённому. В период 3–6 недель после инфицирования, обычно развивается недлительный острый синдром, для которого характерны гриппоподобные симптомы и высокие уровни виремии в периферической крови. В большинстве случаев, после этого развивается ВИЧ-специфичный иммунный ответ и снижение виремии в плазме, обычно в течение 4–6 недель после появления симптомов. После сероконверсии (появления специфических антител) наступает клинически стабильная бессимптомная фаза, способная длиться годами. Для бессимптомного периода характерен невысокий уровень персистирующей виремии в плазме и постепенное снижение уровней CD4+T-лимфоцитов, которое приводит впоследствии к развитию тяжёлого иммунодефицита, множественным оппортунистическим инфекциям, онкогенезу и гибели. У лиц с установленной ВИЧ-1 инфекцией, количественное измерение уровня РНК ВИЧ-1 в крови используют в целях прогноза и контроля антиретровирусной терапии.
Показания
Обнаружение ВИЧ методом полимеразной цепной реакции — ПЦР (качественно) проводится с целью:
Общие правила при подготовке к исследованию:
Отрицательный результат исследования указывает на отсутствие РНК ВИЧ в крови.
Положительный результат — выявление РНК ВИЧ — свидетельствует об инфицировании пациента.
ВИЧ-1, РНК (HIV-1, ПЦР) плазма, кол. в Москве
Приём и исследование биоматериала
Когда нужно сдавать анализ ВИЧ-1, РНК (HIV-1, ПЦР) плазма, кол.?
Подробное описание исследования
Вирус иммунодефицита человека (ВИЧ) – это возбудитель хронической системной вирусной инфекции (ВИЧ-инфекции). Его относят к семейству ретровирусов, или Retroviridae. Вирусная частица представляет собой генетический материал (РНК), упакованный в белковую капсулу – капсид вируса, которая в свою очередь покрыта вирусной оболочкой, или суперкапсидом. На сегодняшний день известны два типа вируса – ВИЧ-1 и ВИЧ-2. ВИЧ-2 распространен преимущественно в западноафриканских странах.
ВИЧ-инфекция – медленно прогрессирующее заболевание, при котором происходит поражение иммунной системы с развитием синдрома приобретенного иммунодефицита (СПИДа). СПИД – это терминальная стадия развития ВИЧ-инфекции, которая сопровождается широким спектром вторичных (оппортунистических) заболеваний. При СПИДе оппортунистические инфекции поражают все органы и системы ВИЧ-инфицированных.
Вирус проникает в клетки, на поверхности которых представлен рецептор CD4 (кластер дифференцировки 4) – трансмембранная гликопротеиновая молекула. Такой рецептор есть только у одного типа клеток – Т-хелперов. Это популяция белых клеток крови (Т-лимфоцитов), которая играет ключевую роль в поддержании необходимого уровня адаптивного иммунного ответа, то есть реакции организма на чужеродные агенты. Это приводит к нарушению функции иммунной системы у ВИЧ-инфицированных.
Вакцины, предотвращающей заражение ВИЧ-инфекцией, не существует. Однако разработаны препараты для антиретровирусной терапии, которая позволяет остановить развитие ВИЧ-инфекции и предотвратить иммунодефицитное состояние.
Для принятия решения о назначении антиретровирусной терапии или для изменения схемы терапии крайне важны два показателя: уровень CD4+ клеток и вирусная нагрузка (количественная концентрация вирусных частиц в крови). Оценить вирусную нагрузку позволяет количественное ПЦР-исследование плазмы крови на наличие РНК возбудителя ВИЧ-инфекции.
Анонимный анализ на ВИЧ
Согласно п.2, ст.8 ФЗ РФ № 38-ФЗ, пациент может анонимно сдать анализ на ВИЧ и получить результат по индивидуальному номеру заказа, не подлежащему разглашению. Тем, кто по каким-либо причинам не имеет возможности приехать на обследование в одно из отделений Лаборатории Гемотест, мы рекомендуем воспользоваться услугой по выезду медсестры для взятия крови с последующей регистрацией взятой пробы как анонимного заказа.
Обращаем Ваше внимание: результаты анонимных анализов на СПИД (ВИЧ) не могут быть использованы для профессиональных осмотров, госпитализации или предоставления лечащему врачу в поликлинике.
Результаты выдаются при предъявлении договора, сметы и документа, удостоверяющего личность самого пациента или представителя пациента, указанного в заказе.
По телефону и электронной почте результаты исследований не сообщаются.
ЕСЛИ АНАЛИЗ НА ВИЧ НАЗНАЧЕН В ЦЕЛЯХ ПОДГОТОВКИ К ГОСПИТАЛИЗАЦИИ ИЛИ ДЛЯ ПРЕДОСТАВЛЕНИЯ В ЛПУ, РЕГИСТРАЦИЯ ЗАЯВОК НА ЕГО ПРОВЕДЕНИЕ ОСУЩЕСТВЛЯЕТСЯ при обязательном предоставлении пациентом следующих данных:
1) Для жителей Москвы и Московской области
2) Для жителей других регионов РФ и иностранных граждан дополнительно – ксерокопию (скан) паспорта.
Особенности и преимущества методики
Тест-система: Реал ВИЧ ПЦР Вектор-Бест (Россия)
Амплификатор: RealTime CFX 96 Biorad (США)
Подготовка к исследованию
Специальной подготовки не требуется. Необходимо соблюдать общие требования подготовки к исследованиям.
Противопоказания и ограничения
Абсолютных противопоказаний нет.
Интерпретация результата
Обнаружение РНК свидетельствует о репликации вируса.